PAK1在豆纹动脉血管内皮损伤及高血压脑出血中的作用

发布时间：2017-03-31 18:05

  本文关键词：PAK1在豆纹动脉血管内皮损伤及高血压脑出血中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：当前,出血性脑卒中是全球致死和致残率最高的心脑血管疾病。在我国,每年有超过200万的新发病例,死亡率高达50%左右,幸存者多伴有严重的神经功能障碍,给患者家庭和社会带来沉重的经济负担和压力。研究发现,国人的脑出血主要表现为高血压性脑出血,其中80%发生在丘脑基底节区,常由豆纹动脉破裂导致。遗憾的是,尽管国内外学者在高血压诱导的出血性脑卒中发生发展机制及其防治方面做了大量深入的研究,并在血管内皮细胞的力学信号转导、血管损伤等过程的研究中获得重要进展,然而有关高血压脑豆纹动脉损伤及其破裂出血的机理问题仍不清楚。已有研究表明,PAK1(p21-activated kinase1,PAK1)过表达严重影响了斑马鱼胚胎早期血管的发育,并导致脑出血的发生。此外,有研究发现PAK1可调控E-cadherin在细胞内的分布,进而影响细胞间的连接。这些研究提示,PAK1可能与血管内皮完整性的调控以及脑出血密切相关。为了深入了解和认识高血压脑豆纹动脉出血的发生机制,为临床高血压脑出血的防治提供新的策略,本文以血管内皮细胞为研究对象,对PAK1是否参与豆纹动脉血管内皮渗透性以及高血压脑出血的调控等问题进行了初步的探索。本论文的具体研究工作和结论如下:目的本文的主要研究目的是初步探讨豆纹动脉破裂是否与血管内皮细胞中PAK1高表达相关;初步探明高盐是否诱导血管内皮PAK1表达升高,并促进高血压环境下血管内皮渗透性增加,进而可能导致瞬时异常高压血流下的血管破裂。方法采用Real-Time PCR、Western Blot、免疫荧光等方法,对不同盐浓度处理的内皮细胞PAK1基因和蛋白表达情况进行量化分析;同时,采用FITC-Dextran通透性方法检测PAK1抑制剂处理后,内皮细胞通透性的变化。在高盐喂食的自发性高血压鼠(SHR)中,采用免疫组化法检测脑豆纹动脉区域血管内皮细胞PAK1表达的情况,并用核磁共振扫描(MRI)、HE染色等技术检测SHR大脑豆纹动脉血管通透性和脑出血的情况。结果1)高盐处理后,内皮细胞PAK1基因和蛋白的表达升高;2)加入PAK1抑制剂IPA-3后,高盐压处理的内皮细胞通透性降低;3)高盐喂食SHR后,豆纹动脉血管内皮细胞PAK1的表达升高;4)高盐喂食SHR后,豆纹动脉血管通透性增加并部分SHR发生脑出血。本文的研究结果初步揭示高盐参与了高血压血管内皮细胞PAK1的表达调控,且对PAK1的表达有增强作用,并提示PAK1可能通过参与调节内皮细胞的通透性等途径,进而参与高血压脑出血的调控。
【关键词】：PAK1 脑出血 豆纹动脉 内皮细胞 高血压
【学位授予单位】：重庆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1;R743.34
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 1 绪论11-21
• 1.1 国内外研究现状11-17
• 1.1.1 高血压脑出血及其危险因素11-12
• 1.1.2 高盐对心脑血管疾病及高血压脑出血的影响12-13
• 1.1.3 PAK1在脑出血等相关疾病调控中的作用13-15
• 1.1.4 高盐对内皮细胞等生物学行为的影响15-17
• 1.2 问题的提出与研究意义17-18
• 1.3 本文的研究目的和主要研究内容18
• 1.3.1 研究目的18
• 1.3.2 主要研究内容18
• 1.4 本文的特色与创新之处18-20
• 1.5 技术路线20-21
• 2 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）原代培养及鉴定21-31
• 2.1 引言21
• 2.2 实验材料21-23
• 2.2.1 内皮细胞21
• 2.2.2 主要仪器设备及耗材21-22
• 2.2.3 主要试剂及配制方法22-23
• 2.3 实验方法23-26
• 2.3.1 内皮细胞的体外分离与原代培养23-25
• 2.3.2 内皮细胞鉴定25-26
• 2.4 实验结果26-28
• 2.4.1 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的培养26-27
• 2.4.2 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的鉴定27-28
• 2.5 讨论28-29
• 2.6 小结29-31
• 3 高盐对血管内皮细胞PAK1表达的影响31-51
• 3.1 引言31
• 3.2 实验材料31-35
• 3.2.1 实验细胞31
• 3.2.2 主要仪器设备及耗材31-32
• 3.2.3 相关主要试剂以及配置方法32-35
• 3.3 相关试验方法35-44
• 3.3.1 细胞培养35
• 3.3.2 高盐处理35-36
• 3.3.3 RNA提取和反转录36-38
• 3.3.4 PAK1基因表达的Real-time PCR检测38-39
• 3.3.5 PAK1蛋白表达的Western blot和免疫荧光检测39-42
• 3.3.6 内皮细胞MMP-2、MMP-9 表达的酶谱检测42-43
• 3.3.7 内皮细胞通透性检测43-44
• 3.4 实验结果44-47
• 3.4.1 高盐处理对内皮细胞PAK1基因和蛋白水平表达的影响44-45
• 3.4.2 高盐处理对内皮细胞MMP-2 和MMP-9 表达和活性的影响45-46
• 3.4.4 高盐处理对内皮细胞通透性的影响46-47
• 3.5 讨论47-48
• 3.6 本章小结48-51
• 4 高盐对SHR脑豆纹动脉内皮细胞PAK1表达及血管渗透性的影响51-67
• 4.1 引言51
• 4.2 实验材料51-53
• 4.2.1 实验动物51
• 4.2.2 实验材料与仪器设备51-52
• 4.2.3 相关主要试剂以及配置方法52-53
• 4.3 相关试验方法53-59
• 4.3.1 自发性高血压鼠（SHR）饲养53-54
• 4.3.2 自发性高血压鼠（SHR）血压、心率、血液生理生化指标的检测54-55
• 4.3.3 SHR鼠心脏灌注和摘取脑组织55-56
• 4.3.4 SHR脑豆纹动脉血管内皮细胞PAK1表达的免疫组织化学染色法检测56-57
• 4.3.5 SHR脑豆纹动脉血管通透性及出血的检测57-59
• 4.4 实验结果59-65
• 4.4.1 高盐对SHR血压、心率、血液生理生化指标的影响59-61
• 4.4.2 高盐对SHR脑豆纹动脉血管内皮细胞PAK1表达的影响61-63
• 4.4.4 高盐对SHR脑豆纹动脉血管通透性及出血的影响63-65
• 4.5 讨论65
• 4.6 小结65-67
• 5 结论与展望67-69
• 5.1 本文研究的主要结论67
• 5.2 后续工作及展望67-69
• 致谢69-71
• 参考文献71-79
• 附录79
• A. 作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目情况79

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 万和斌,殷瑞和,刘景萍;微侵袭治疗大出血量高血压脑出血32例报道[J];临床荟萃;2000年21期

2 张应春,徐圣奎;微创颅内血肿清除术治疗高血压脑出血(附32例报告)[J];临床荟萃;2000年23期

3 刘中洪,孙李法,黄鼎孝;高血压脑出血87例手术治疗[J];中国医师杂志;2000年S1期

4 刘伟英;高血压脑出血微创治疗的护理[J];山东医药;2001年12期

5 黄载文,曹传伟,宁世金;微创颅内血肿清除术治疗中重型高血压脑出血35例[J];中国神经精神疾病杂志;2001年03期

6 陈晓雷,耿军,陈硕朗;联合评分在高血压脑出血预后的评估及手术指征探讨中的应用[J];广州医学院学报;2001年03期

7 蒲智,龚措杰,薛松,吴科学;西藏高血压脑出血外科治疗的现状[J];西藏医药杂志;2001年02期

8 刘培英,王勇;外科治疗高血压脑出血临床体会[J];中华神经外科杂志;2002年03期

9 杨桐,苏平,徐全;高血压脑出血死亡因素分析[J];黑龙江医学;2002年08期

10 李党明,杨凯;微创颅内血肿清除术治疗高血压脑出血19例疗效分析[J];河南实用神经疾病杂志;2002年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 赵斌;;颅内血肿微创穿刺粉碎清除术治疗高血压脑出血25例[A];第二十五届航天医学年会暨第八届航天护理年会论文汇编[C];2009年

2 佘晓春;;高血压脑出血穿颅清除术41例临床体会[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

3 朱军;刁兴涛;王泉相;;高血压脑出血治疗研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

4 刘国栋;兰青;;各种手术治疗高血压脑出血的疗效分析[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

5 师林;;高血压脑出血患者死亡高危因素分析[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

6 曾素英;;微创颅内血肿清除术治疗高血压脑出血的护理体会[A];全国门、急诊护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2003年

7 肖莉;张志华;卓衍华;谭光林;焦林;杜平;;急诊绿色通道在抢救高血压脑出血患者中的价值[A];第十一次全国急诊医学学术会议暨中华医学会急诊医学分会成立二十周年庆典论文汇编[C];2006年

8 谢平;曾建辉;;微创颅内血肿清除术治疗高血压脑出血[A];农村中医药适宜技术交流及推广研讨会论文集[C];2006年

9 徐学华;黄财恕;林承怀;;高血压脑出血的外科治疗(附61例报告)[A];中国医师协会神经外科医师分会第二届全国代表大会论文汇编[C];2007年

10 陶春潮;栾国平;;高血压脑出血的外科治疗[A];中国医师协会神经外科医师分会第二届全国代表大会论文汇编[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 匡远深;微创治疗高血压脑出血论文在美获奖[N];中国医药报;2009年

2 本报记者 慕欣;高血压脑出血：血量过多应手术[N];医药经济报;2011年

3 健康时报记者 冯丽安;高血压脑出血可手术[N];健康时报;2008年

4 陈汉桥;重型高血压脑出血治疗有新方法[N];中国医药报;2002年

5 袁俊荣;高血压脑出血多由不按时服药引起[N];大众卫生报;2004年

6 刘春谊;社区家庭病床治疗高血压脑出血[N];农村医药报（汉）;2008年

7 记者匡远深;显微术碎吸术治高血压脑出血有优势[N];健康报;2009年

8 承德市中心医院神经外科副主任 主任医师 教授 武焕颖;高血压脑出血的外科治疗[N];承德日报;2011年

9 陈琳 黄红云;高血压脑出血 可选置管引流[N];健康报;2006年

10 陈茂梁 徐世伟;脑室镜下治疗脑出血[N];中国医药报;2001年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 苗旺;雌激素对高血压脑出血患者内皮祖细胞的影响及其机制研究[D];中南大学;2008年

2 蒋永祥;弥散张量成像技术在基底节区高血压脑出血患者预后评估中的应用研究[D];重庆医科大学;2012年

3 陈现红;高血压脑出血临床回顾性分析及其脑水肿发生机制研究[D];第一军医大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨凯;不同手术方式及手术时机治疗高血压脑出血的研究[D];泰山医学院;2014年

2 张艳利;TNF-α、VEGF及ET-1在高血压脑出血血肿周围脑组织中的表达及其相关性的研究[D];河北医科大学;2015年

3 唐黎;石河子市高血压脑出血流行病学特征及预后相关因素研究[D];石河子大学;2015年

4 陆飞宇;南京地区汉族人群脂联素基因多态性与高血压脑出血相关研究[D];东南大学;2015年

5 党少辉;星状神经节阻滞对高血压脑出血患者预后影响的临床分析[D];新疆医科大学;2016年

6 赵辉;同型半胱氨酸在小鼠高血压脑出血中的作用及机制研究[D];北京协和医学院;2016年

7 郭强;中药针刺对老年高血压脑出血微创手术后早期治疗的临床研究[D];辽宁中医药大学;2016年

8 钱章林;影响高血压脑出血微创治疗短期预后的相关因素分析[D];石河子大学;2016年

9 张钶;早期强化降压对高血压脑出血患者颅内血肿及水肿的影响[D];重庆医科大学;2016年

10 马剑波;血脂水平紊乱在青年高血压脑出血患者中的风险性研究[D];东南大学;2016年

  本文关键词：PAK1在豆纹动脉血管内皮损伤及高血压脑出血中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：279908