SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究

发布时间：2017-04-01 19:06

  本文关键词：SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景和目的:氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)与动脉粥样硬化形成密切相关。自噬在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中有降解ox-LDL的作用。Sirtuin1(SIRT1),一种新型抗动脉粥样硬化因子,是哺乳动物沉默信号调节因子2的同源物,对细胞的生存、代谢等生理活动起着十分重要的调节作用,可能是所有生物共同的寿命控制基因之一,并且有诱导自噬作用。本文研究SIRT1对HUVECs内ox-LDL聚集的影响,并初步探讨其作用是否与其促进ox-LDL自噬性降解有关。方法:1.流式细胞仪检测SIRT1抑制剂尼克酰胺(nicotinamide,NAM)和激动剂白藜芦醇(resveratrol,RSV)对Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响;利用SIRT1小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转染构建SIRT1 si RNA内皮细胞模型,并用流式细胞仪检测其对Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响。2.利用自噬相关基因Atg5小干扰RNA转染构建Atg5 si RNA内皮细胞模型,流式细胞仪检测其对白藜芦醇抑制Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响;采用蛋白免疫印迹方法检测自噬流相关蛋白LC3、p62的蛋白含量,并用GFP-LC3质粒转染技术在荧光显微镜下观察各组LC3荧光点的数目;通过免疫荧光技术观察HUVECs中Dil-ox-LDL与溶酶体标志物Lamp1和Cathepsin D的共定位情况。结果:1.流式细胞术检测结果显示SIRT1 si RNA和NAM增加HUVECs中Dil-ox-LDL的荧光强度,RSV减少HUVECs中Dil-ox-LDL的荧光强度。2.敲减Atg5增加HUVECs中Dil-ox-LDL的荧光强度;与RSV组相比,Atg5 si RNA和RSV组的HUVECs中Dil-ox-LDL荧光强度增加。3.免疫印迹结果显示ox-LDL升高LC3-II和p62的蛋白表达,与单独ox-LDL组相比,SIRT1 si RNA+ox-LDL组和NAM+ox-LDL组LC3-II的蛋白表达降低,p62蛋白水平升高,RSV+ox-LDL组LC3-II的蛋白表达升高,p62蛋白水平降低。运用GFP-LC3质粒转染技术在荧光显微镜下观察发现SIRT1 si RNA和NAM减少LC3点状物数目,RSV增加LC3点状物数目。4.免疫荧光结果显示Dil-ox-LDL与Lamp1及Cathepsin D部分共定位,与Dil-ox-LDL单独组相比,SIRT1 si RNA和NAM减少Dil-ox-LDL和Lamp1及Cathepsin D共定位程度,RSV增加Dil-ox-LDL和Lamp1及Cathepsin D共定位程度。结论:SIRT1抑制剂及敲减SIRT1基因增加ox-LDL在HUVECs中的聚集,SIRT1激动剂则减少ox-LDL在HUVECs中的聚集,SIRT1的这种调控作用与其对自噬溶酶体途径的调节有关。
【关键词】：SIRT1 氧化低密度脂蛋白 聚集 人脐静脉内皮细胞 自噬溶酶体途径
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743;R54
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 第一部分 SIRT1 对人脐静脉内皮细胞中氧化低密度脂蛋白聚集的影响12-23
• 材料与方法12-19
• 结果19-21
• 讨论21-23
• 第二部分 SIRT1 影响氧化低密度脂蛋白在人脐静脉内皮细胞聚集的可能机制23-35
• 材料和方法23-27
• 结果27-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 参考文献36-42
• 综述42-62
• 参考文献55-62
• 中英文对照缩略词汇表62-63
• 攻读学位期间公开发表的论文63-64
• 致谢64-65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘友斌;杨树森;樊瑛;甘润韬;;自噬与心肌缺血/再灌注损伤[J];中国病理生理杂志;2009年12期

  本文关键词：SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：281118