虫草素体外抑制胶质瘤细胞U87效应研究

发布时间：2020-09-04 07:42

　　目的:胶质瘤是目前成人中最常见的脑肿瘤,其发病率占颅内肿瘤的81%?由于胶质瘤是占比最大、侵袭性强以及恶性程度高的肿瘤,胶质母细胞瘤患者的5年生存率仅有5%?尽管针对胶质瘤近年来的研究取得了很大的进展,但对胶质瘤治疗临床上尚无实质性突破,胶质瘤的预后仍然不容乐观?KDR编码的蛋白质也称为血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2),它是VEGF信号相关的血管生成因子的重要受体。本研究目的旨在将虫草素提取物应用于人神经胶质瘤细胞U87,探讨虫草素对人胶质瘤细胞U87的抑制作用及其作用机制,为临床治疗人胶质瘤提供新思路?方法:以人胶质瘤细胞U87为研究对象,研究分析虫草素对胶质瘤细胞U87作用后,细胞生长活性的量效和时效的特征?应用流式细胞仪,MTT比色法,实时荧光定量PCR检测虫草素作用后的胶质瘤细胞U87生长抑制作用、凋亡率以及KDR基因的表达的情况?在0、20、40、80、160、320μmol/L浓度虫草素作用下,以0μmol/L浓度虫草素作为阴性对照,TMZ作为阳性对照,观察胶质瘤细胞U87形态?细胞划痕实验、流式细胞仪、MTT法以及实时荧光定量PCR等方法用于研究胶质瘤细胞U87的抑制效应及其作用机制?结果:1.在0、20、40、80、160、320μmol/L不同浓度的虫草素作用下,胶质瘤细胞U87逐渐收缩、变圆、折光率变差?随着浓度增高、作用时间延长,细胞脱落现象加剧,细胞形态发生改变?2.80μmol/L浓度的虫草素分别作用24h和48h后,胶质瘤细胞U87增殖受到不同程度的抑制?3.在0、20、40、80、160、320μmol/L浓度的虫草素培养48h后的U87细胞,流式细胞仪检测结果显示:随着浓度增大,U87细胞凋亡逐渐增加?4.胶质瘤细胞U87经0、20、40、80、160、320μmol/L浓度虫草素作用不同时间后,细胞增殖均受到不同程度的抑制,并呈剂量-时间依赖性?5.Real-time PCR结果显示,虫草素组和TMZ组的KDR基因的mRNA表达水平与对照组相比均显著降低,且虫草素的剂量越大,KDR基因的表达程度越低?结论:1.经虫草素作用后,U87细胞出现明显的细胞活性降低现象,细胞脱落加剧,且具有浓度依赖性和时间依赖性;2.胶质瘤细胞U87经虫草素作用后,细胞增殖能力显著抑制,细胞迁移能力降低,且凋亡显著增加,具有时间依赖性及剂量依赖性;3.虫草素作用胶质瘤U87细胞后,KDR mRNA表达显著降低,具有与虫草素抑制U87细胞效应相一致,表明虫草素通过调控KDR的表达发挥抑瘤效应。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R739.4
【部分图文】：

虫草素,形态变化,时效特征,细胞

图 3.1 虫草素作用胶质瘤细胞 U87 形态变化3.1.2 虫草素抑制胶质瘤细胞 U87 的时效特征经 20、80、320μmol/L 虫草素和 TMZ 分别处理 U87 细胞 24h 和 48h。随着

划痕实验,细胞,虫草素,细胞生长

.2 虫草素作用 24h 和 48h 胶质瘤细胞 U87 形态变化3.2 细胞划痕实验胶质瘤细胞 U87 经 80 μmol/L 浓度虫草素和 TMZ 作用 24h 和 48h 后(见图3.3)，经 100 倍光学显微镜放大，观察到细胞增殖均受到不同程度的抑制，0μmol/L 浓度虫草素生长活跃，情况正常；TMZ 随着时间增加，细胞生长缓慢，细胞生长受到抑制；80 μmol/L 浓度虫草素与 0 μmol/L 浓度虫草素相比，随着时间增加，细胞生长缓慢，受到抑制。80 μmol/L 浓度虫草素与同浓度 TMZ 相比，细胞生长情况大致相同，并呈时效依赖性。图 3.3 细胞划痕实验结果

流式细胞仪检测,虫草素

图 3.4 流式细胞仪检测胶质瘤细胞 U87表 3.1 不同浓度虫草素处理后胶质瘤细胞 U87 凋亡率/% ( )度/ μmol/L 重复批次凋亡率/%

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