枸杞多糖对脑出血大鼠脑保护作用及其机制的实验研究

发布时间：2017-04-03 14:08

  本文关键词：枸杞多糖对脑出血大鼠脑保护作用及其机制的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides,LBP)对脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)模型大鼠继发性脑损伤的影响,进而探索LBP脑保护作用及其可能机制方法180只SD大鼠,随机分为假手术(Ⅰ)组、模型(Ⅱ)组、LBP低剂量(Ⅲ)组、LBP中剂量(Ⅳ)组、LBP高剂量(Ⅴ)组、尼莫地平(Ⅵ)组,每组30只;术前15日,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别给予LBP 50、100、200mg·kg-1灌胃,Ⅵ组给予尼莫地平10mg·kg-1灌胃,Ⅰ、Ⅱ组给予等体积生理盐水,1次/日;灌胃结束,采用自体血二次注入法制作大鼠脑出血模型;脑出血后4h、8h、12h、24h、48h,对各组大鼠进行Bederson神经功能评分;48h后,部分大鼠直接断头取脑,部分大鼠4%多聚甲醛灌注后取脑;检测各组大鼠脑组织水肿体积、脑含水量、MDA含量、SOD活性;HE染色后,观察脑出血区及其周围脑组织中各细胞的大小、形态;利用TUNEL法检测神经细胞凋亡;利用Western Blot、免疫组化、RT-PCR技术检测ICH后PAR-1、TNF-α、Bcl-2的表达。结果1、与假手术组比较,模型组各时点神经功能评分均显著增高(P0.05);与同时点模型组比较,中、高剂量组神经功能评分在12h、24h和48h明显低于模型组(P0.05),尼莫地平组24h和48h明显低于模型组(P0.05);2、与假手术组比较,模型组脑组织水肿体积较大、脑含水量较高、SOD活性较低、mda含量较多(p0.05或p0.01)。与模型组比较,各给药组脑组织水肿体积减小、脑含水量降低、sod活性增高、mda含量降低显著(p0.05或p0.01);3、he染色发现:脑出血后,出血区有血凝块形成,期间夹杂着死亡细胞的胞核及细胞碎片,出血区周围脑组织可见不同程度的破坏,神经细胞与神经胶质细胞排列紊乱;但未能发现各给药组与模型组之间的差异;4、tunel实验发现,外界机械刺激均可以引起神经细胞凋亡,但是较单纯的手术进针而言,脑出血导致的神经细胞凋亡更加显著。表现为:tunel阳性细胞在脑出血组,大量分布于出血区及其周围脑组织中,而在假手术组,仅少量分布于针道周围。lbp各剂量组与尼莫地平组tunel阳性细胞比例较模型组显著下降(p0.01或p0.05);5、ich组par-1阳性细胞的比例,par-1蛋白的表达,par-1mrna的表达较假手术组(p0.05或p0.01).与模型组比较,lbp各剂量组par-1蛋白的表达显著减少(p0.05),par-1阳性细胞比例显著降低(p0.01),par-1mrna的表达显著减少(p0.01);6、脑出血后,tnf-α的表达显著增加、bcl-2的表达显著减少,而lbp能够抵抗脑出血导致的这些改变,表现为:(1)、lbp各组tnf-α蛋白的表达、tnf-α阳性细胞比例、tnf-αmrna的表达均较模型组显著减少(p0.01或p0.05);(2)、lbp各组bcl-2蛋白的表达、bcl-2阳性细胞比例及bcl-2mrna的表达显著增加(p0.01或p0.05)。结论1、枸杞多糖的预防性应用,能够减轻脑出血导致的神经功能缺失(该作用在脑出血12h以后才逐渐显现)、脑组织水肿、氧自由基损伤、神经细胞凋亡。2、枸杞多糖对脑出血继发神经细胞凋亡的抑制机制,可能是通过干预par-1的表达,也可能是通过抑制细胞凋亡的内源途径和外源途径来实现。
【关键词】：脑出血 枸杞多糖 继发性脑损伤 保护作用 细胞凋亡
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.34
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 符号说明10-14
• 前言14-16
• 材料和方法16-34
• 1.实验材料16-20
• 1.1 实验动物及分组16
• 1.2 主要实验试剂与仪器16-18
• 1.3 主要实验耗材18
• 1.4 主要实验试剂配制18-20
• 2.实验方法20-34
• 2.1 造模前灌胃给药20-21
• 2.2 脑出血模型的制备21
• 2.3 大鼠神经功能评分21-22
• 2.4 脑组织水肿体积测定22
• 2.5 脑含水量测定22
• 2.6 脑组织匀浆MDA含量检测22-23
• 2.7 脑组织匀浆SOD活性检测23-24
• 2.8 石蜡切片的制作24-25
• 2.9 HE染色25
• 2.10 TUNEL细胞凋亡检测25-26
• 2.11 免疫组化实验26-27
• 2.12 Western blot实验27-30
• 2.13 RT-PCR实验30-33
• 2.14 数据统计分析33-34
• 结果34-47
• 1 LBP对大鼠神经功能评分的影响34-35
• 2 LBP对大鼠脑组织水肿体积及脑含水量的影响35-37
• 3 LBP对大鼠脑组织MDA含量及SOD活性的影响37
• 4 LBP对大鼠脑组织切片HE染色结果的影响37-39
• 5 LBP对大鼠神经细胞凋亡的影响39-40
• 6 LBP对ICH后脑组织中PAR-1 表达的影响40-42
• 7 LBP对ICH后脑组织中TNF-α 表达的影响42-44
• 8 LBP对ICH后脑组织中Bcl-2 表达的影响44-47
• 讨论47-50
• 结论50-51
• 参考文献51-57
• 综述57-69
• 综述参考文献65-69
• 致谢69-70
• 攻读硕士学位期间发表的论文70-71
• 个人简介71

  本文关键词：枸杞多糖对脑出血大鼠脑保护作用及其机制的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：284435