重组冷休克蛋白的表达纯化及其神经保护机制的研究

发布时间：2020-10-19 08:15

　　 冷休克蛋白(cold inducible RNA-binding protein, CIRP)是低温诱导表达出的具有调节细胞生长周期,神经保护等作用的蛋白。我们前期的研究观察到亚低温下CIRP表达增加,能够减少H202诱导的细胞凋亡。因此本次研究旨在利用原核表达系统大量表达CIRP并纯化。外源性给予小鼠神经细胞Nuero2a,并用H202刺激,观察其生长周期变化,以及凋亡情况,并探索上述实验外源性CIRP参与神经保护过程中的相关分子及可能信号转导通路。方法首先诱导表达基因克隆重组CIRP蛋白,采用阴阳离子结合柱,分子筛等手段进行重组蛋白纯化。将得到的CIRP预孵育小鼠Neuro2a田胞1h后,同对照组一起加入H202刺激24 h,应用MTT对细胞活力、流式细胞仪对细胞周期、Western blotting从细胞蛋白水平研究CIRP对H202介导的细胞周期信号通路上相关因子的变化情况。结果CIRP预处理组相比对照组细胞凋亡数目明显下降,对照组细胞周期被阻滞在S期,而CIRP组明显缓解阻滞效果。Western blotting检测结果发现CIRP预处理组p-Akt、p-ERK等信号通路因子表达水平相比对照组显著增高与内源性过表达CIRP结果一致。由此认为外源性CIRP在细胞水平与亚低温所起到的神经保护功能及其分子调控方面起着相同的作用,同时为CIRP治疗脑损伤的作用机理提供了一定依据。
【学位单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R741
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一部分 重组蛋白CIRP的原核表达与纯化
    前言
    一、实验材料
    二、实验方法
    实验结果
    讨论
第二部分 重组冷休克蛋白对小鼠N2A、NCTC等细胞生物学特性影响的研究
    前言
    一、实验材料
    二、实验方法
    实验结果
    讨论
参考文献
综述
    参考文献
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本文编号：2846959