电针结合脑内注射VEGF法对脑缺血后再灌注损伤大鼠内质网应激反应相关蛋白的影响

发布时间：2020-11-12 15:52

　　 目的观察电针、电针结合脑内注射血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)法对脑缺血后再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关蛋白——激活转录因子6(Activating Transcription Factor 6,ATF6)、肌醇依赖酶1(inositol-requiring enzyme,IRE1)、X盒结合蛋白1(X-box-binding protein 1,XBP1)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated p rotein 78,GRP78)的影响,探讨电针结合脑内注射VEGF法对CIRI的修复作用。方法将雄性SD大鼠68只,随机分为假手术组(J)、模型组(M)、电针组(EA)、脑内注射VEGF组(VEGF)、电针结合脑内注射VEGF组(EA+VEGF),其中假手术组8只,其余各组每组15只,用线栓法对模型组、电针组、脑内注射VEGF组、电针结合脑内注射VEGF组实施MCAO造模。假手术组只做手术,不插线栓。电针组及电针+VEGF组大鼠于造模完成24 h后,针刺“百会”、左侧“曲池”及“足三里”,行电针干预治疗,一日一次,30分钟每次,共治疗14天。治疗同时将模型组、假手术组、VEGF组进行相同时间固定,但不针刺。VEGF组及电针+VEGF组大鼠于造模完成24小时后,向侧脑室内一次性注入10μl VEGF(0.025μg/μl)。干预14天后,检测各组大鼠神经功能评分(mNSS);使用尼氏染色法对大鼠CIRI区域的脑组织进行观察;用Western blot法测定大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78蛋白含量;用RT-PCR法测定大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 mRNA的含量。结果模型组大鼠mNSS评分相比假手术组有显著升高(P0.05);电针组、VEGF组、电针+VEGF组mNSS评分相比模型组均有显著降低(P0.05);电针+VEGF组mNSS评分,相比于电针组、VEGF组有着显著降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组尼氏小体数低于假手术组(p0.05);与模型组比较,电针组、VEGF组、电针+VEGF组尼氏小体数均高于模型组(P0.05);电针+VEGF组尼氏小体数相比于电针组、VEGF组,明显升高(P0.05)。模型组大鼠的ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78含量相比假手术组均有所升高(P0.05);电针组、VEGF组、电针+VEGF组ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量均明显低于模型组(P0.05),GRP78蛋白的含量则明显高于模型组(P0.05);电针+VEGF组ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量相比于电针组、VEGF组,其含量明显有所降低(P0.05),GRP78蛋白含量则有明显升高(P0.05)。模型组大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 mRNA含量相比于假手术组,均有所升高(P0.05);电针组、VEGF组、电针+VEGF组ATF6、IRE1、XBP1、CHOP mRNA含量相比于与模型组,均有所降低(P0.05),GRP78 mRNA含量则有所升高(P0.05);电针+VEGF组ATF6、IRE1、XBP1、CHOP mRNA含量相比于电针组、VEGF组,均有所降低(P0.05),GRP78 mRNA含量则有所升高(P0.05)。结论电针结合脑内注射VEGF可促进CIRI组织修复,这种机制可能是通过下调ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量,上调GRP78蛋白含量所实现的,且其效果比单纯使用电针法、脑内注射VEGF法更具优势。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R743.3
【部分图文】：

图 2 各组尼氏染色单位面积内尼氏小体数目Fig 2 Nissl staining of Nissl's body number per unit area of SD rat of thM , EA ,VEGF and EA+VEGF groups P <0.05，与假手术组比较；▲P <0.05，与模型组比较；★P <0.05，比较；☆P <0.05，与脑内注射 VEGF 组比较。ment: P <0.05, vs the J group; ▲P <0.05, vs the model group; ★P the EA group; ☆P <0.05, vs the VEGF group.3 Western blot 法测定蛋白 ATF6、IRE1、XBP1、CHGRP78 的含量结果如图 3 及表 5 所示，模型组 ERS 相关蛋白 ATF6、IRE1、CHOP、XBP1、G均高于假手术组（P<0.05）；电针组、脑内注射 VEGF 组、电针+脑内

3 各组 SD 大鼠 ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 蛋白含量的比较（ x ± s,N=8）Fig 3 Comparison of expression levels of collagen type II、DDR2 and MMProteins in among SD rat of the J, M , EA ,VEGF and EA+VEGF groups( x ± s, N=8) 5 各组 SD 大鼠 ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 蛋白含量的比较( x ± s, N=8) 5 Comparison of expression levels of ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRProteins in among SD rat of the J, M , EA ,VEGF and EA+VEGF groups( x ± s, N=8)

内质网应激反应是细胞本身的一种自我保护机制，受多种信号反应通路系统及基因的表达调控[39]。GRP78 内质网应激相关蛋白，其在对内质网应激反应调控中有较为重要的作用。生理情况下，GRP78 以共价键与新生多肽短暂结合，发生解离后，能够促使蛋白质进行正常折叠。如图 4 所示，当无 ERS 时， GRP78 与 ATF6、IRE1 相结合。发生 ERS 时，未折叠蛋白的堆积促使 GRP78 从 ATF6、IRE1 蛋白上解离，从而可以去结合未折叠蛋白，使内质网恢复其正常功能。GRP78 发生解离后，ATF6 通路及 IRE1 通路均被活化，并诱导细胞凋亡。正常生理状态下 ATF6 酶原 ATF6p90 存储于内质网中，当发生 ERS 后，ATF6p90 转入高尔基体内发生水解，指导 XBP1 以及相关促进蛋白质折叠所需蛋白、酶的合成表达，从而启动细胞凋亡途径[40-41]。当 IRE1被活化后，能够使 XBP1mRNA 发生裂解，生成 XBP1。同时，XBP1 也是 IRE1信号途径的标志物。IRE1 通路及 ATF6 通路活化都均能诱导 CHOP 生成，启动细胞凋亡[42-43]。
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本文编号：2880931