MIR137对细胞自噬的调控作用及机制研究

发布时间：2017-04-07 07:18

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【摘要】：目的探讨MIR137对细胞自噬的调控作用及调控机制。方法(1)慢病毒、拮抗剂转染调控U87细胞中MIR137的表达水平,RT-PCR检测转染效果。(2)D-hank's液处理细胞以诱发自噬,荧光显微镜下统计各组细胞GFP-LC3 Ⅱ阳性率,western blot定量分析各组细胞自噬标记蛋白LC3 Ⅱ和SQSTM1的表达量,评估MIR137对自噬水平的影响。(3)RT-PCR、western blot定量分析ATG7基因的mRNA和蛋白表达量,评估MIR137对ATG7表达量的影响。(4)重组ATG7质粒分别与MIR137高表达慢病毒和拮抗剂共转染,增加各组细胞中ATG7的表达水平,RT-PCR检测转染效果。(5)Dhank's液作为饥饿诱导剂诱发细胞自噬,western blot定量分析各组细胞自噬标记蛋白LC3 Ⅱ和SQSTM1的表达量,评估ATG7对自噬水平的影响。(6)MTT分析MIR137高表达对阿霉素化疗效果的影响。结果(1)慢病毒和拮抗剂转染组MIR137表达量分别为2.53±0.14和0.39±0.06,较对照组分别存在上调和下调；(2)饥饿诱导可增加U87细胞的自噬活动,但对MIR137的表达无明显影响。(3)与对照组相比,慢病毒组和拮抗剂组LC3 Ⅱ蛋白的表达量分别为0.75±0.12和4.65±0.13,分别存在下调和上调,SQSTM1蛋白的表达量分别为0.94±0.15和0.24±0.03,分别存在上调和下调。(4)慢病毒组和拮抗剂组ATG7基因表达量分比为0.26±0.07、1.53⒈0.06,较对照组(0.99±0.01)分别存在下调和上调。(5)慢病毒组、ATG7质粒+慢病毒组、ATG7质粒+对照组中ATG7基因的表达量分别为1.01±0.01、1.72±0.12、3.56q±0.71；慢病毒组、ATG7质粒+慢病毒组中LC3Ⅱ蛋白的表达分别为0.76±0.10、1.64±0.44。(6)两组细胞的存活率均随药物浓度的增加而降低；相同条件下,慢病毒组的细胞存活率较对照组降低。结论MIR137可通过调控ATG7的表达,进而抑制饥饿诱导的自噬活动；MIR137可增加U87细胞对阿霉素的化疗敏感性。
【关键词】：胶质瘤 microR-137 自噬 阿霉素
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 英汉缩略词对照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 1 材料与方法12-18
• 2 结果18-22
• 3 讨论22-25
• 全文结论25-26
• 参考文献26-31
• 文献综述：miRNA对自噬的调控作用31-40
• 参考文献35-40
• 致谢40-41
• 攻读研究生学位期间发表的论文41

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本文编号：289933