6-OHDA对少突胶质细胞铁代谢的影响

发布时间：2020-12-16 18:24

　　目的:帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,其主要病理学特征是中脑黑质致密带（substantia nigra pars compacta,SNpc）多巴胺（dopamine,DA）能神经元缺失以及路易小体的出现。大量的研究证实,黑质（substantia nigra,SN）部位铁的异常聚集是PD发病的主要原因。铁在脑内的转运有两种主要的途径:转铁蛋白（transferrin,Tf）结合铁和非转铁蛋白结合铁（non-transferrin binding iron,NTBI）,其中二价金属离子转运蛋白（divalent metal transporter 1,DMT1）是主要的NTBI转运形式。而铁的转出则是通过铁转运蛋白1（ferroportin 1,FPN1）实现的,FPN1是目前所知唯一一种跨膜的铁转出蛋白。在人类中,不管未分化还是分化的少突胶质细胞,铁的转入都是通过Tf或铁蛋白与转铁蛋白受体1（transferrin receptor1,TfR1）结合介导。在中枢神经系统中,少突胶质细胞是主要的铁染色阳性细胞,而在PD SN... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料和方法
    1 MO3.13少突胶质细胞、原代大鼠OPCs培养
        1.1 细胞来源
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 常用液体配制
        1.5 MO3.13少突胶质细胞培养步骤
        1.6 原代大鼠OPCs培养与筛选
    2 免疫组织化学方法鉴定原代培养大鼠OPCs纯度
        2.1 实验试剂
        2.2 实验仪器
        2.3 常用液体的配制
        2.4 操作步骤
    3 MTT检测6-OHDA对MO3.13OPCs活性的影响
        3.1 实验试剂
        3.2 常用仪器
        3.3 MTT的方法原理与操作步骤
    4 PMA诱导未分化的MO3.13少突胶质分化成分化的MO3.13少突胶质细胞
        4.1 实验试剂
        4.2 实验操作步骤
    5 钙黄绿素负载检测培养未分化的MO3.13少突胶质细胞、分化的MO3.13少突胶质细胞铁转入功能
        5.1 实验试剂
        5.2 实验仪器
        5.3 液体配制
        5.4 未分化的MO3.13少突胶质细胞接种与药物处理
        5.5 分化的MO3.13少突胶质细胞接种与药物处理
        5.6 铁转入实验
    6 荧光实时定量PCR检测未分化的MO3.13少突胶质细胞、分化的MO3.13少突胶质细胞FPN1、TfR1、IL-6、TNF-αmRNA表达
        6.1 实验试剂
        6.2 实验仪器
        6.3 细胞接种与药物处理
        6.4 RNA的提取及逆转录反应
        6.5 荧光实时定量（realtime）PCR
    7 Westernblot检测MO3.13少突胶质细胞和原代大鼠OPCsIRP1、TfR1、FPN1蛋白表达
        7.1 实验试剂
        7.2 实验仪器
        7.3 所用药物的配制
        7.4 常用液体配制
        7.5 细胞接种与药物处理
        7.6 总蛋白的提取和定量
        7.7 十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳及转膜
    8 动物准备
        8.1 实验试剂
        8.2 实验仪器
        8.3 常用液体配制
        8.4 PD大鼠模型制备
    9 统计学处理
结果
    1 MTT检测不同浓度6-OHDA处理未分化的MO3.13少突胶质细胞的细胞活力
    2 10μM、100μM6-OHDA处理未分化的MO3.13少突胶质细胞IRP1、FPN1和TfR1的蛋白表达水平
    3 10μM、100μM6-OHDA处理未分化的MO3.13少突胶质细胞FPN1和TfR1的mRNA表达水平
    4 10μM、100μM6-OHDA对未分化的MO3.13少突胶质细胞铁转入功能的影响
    5 10μM、100μM6-OHDA处理未分化的MO3.13少突胶质细胞IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平
    6 PMA诱导为分化的MO3.13少突胶质细胞分化成熟
    7 10、100μMμM6-OHDA处理分化的MO3.13少突胶质细胞IRP1、FPN1和TfR1的蛋白表达水平
    8 10μM、100μM6-OHDA处理分化的MO3.13少突胶质细胞FPN1和TfR1的mRNA表达水平
    9 10μM、100μM6-OHDA对分化的MO3.13少突胶质细胞铁转入功能的影响
    10 10μM、100μM6-OHDA处理分化的MO3.13少突胶质细胞IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平
    11 6-OHDA处理OPCs促进细胞的增殖
    12 提取纯化后的原代大鼠OPCs已达到实验所需要的水平
    13 6-OHDA处理原代大鼠OPCsIRP1、FPN1和TfR1的蛋白表达水平
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]低氧诱导因子对铁代谢的调节（英文）[J]. 许曼曼,王俊,谢俊霞.  生理学报. 2017(05)
[2]Oligodendroglia and neurotrophic factors in neurodegeneration[J]. Andrew N.Bankston,Mariana D.Mandler,Yue Feng.  Neuroscience Bulletin. 2013(02)
[3]NG2 Cell Response in the CNP-EGFP Mouse After Contusive Spinal Cord Injury[J]. JUDITH M LYTLE,RAMESH CHITTAJALLU,JEAN R WRATHALL,VITTORIO GALLO.  神经损伤与功能重建. 2009(01)



本文编号：2920582