miR-200a靶向抑制MAGED4及其对胶质瘤迁移侵袭的影响

发布时间：2020-12-28 22:38

　　目的:探讨miR-200a与MAGED4之间是否存在靶向调控关系,以及miR-200a对胶质瘤迁移侵袭能力的影响。方法:（1）运用多种生物信息学在线软件,获取MAGED4基因的3′UTR下游序列,预测MAGED4潜在的microRNA调控因子及结合位点。运用生物信息学在线软件获取microRNA基因的相关信息;（2）microRNA qRT-PCR:提取总RNA检测正常脑组织和胶质瘤细胞株miR-200a表达量;（3）胶质瘤细胞株中转入外源性miR-200a Minics或Inhibitors,上调或下调miR-200a表达;（4）分别构建MAGED4 3′UTR野生型（WT）和突变型（MUT）荧光素酶报告基因载体(WT^{MAGED4-3′UTR},MUT^{MAGED4-3′UTR}),将这两种载体分别转入HEK 293T细胞、A172细胞和U87细胞,检测荧光素酶活性,验证miR-200a对MAGED4的靶向调控作用;（5）qRT-PCR和Western Bloting:提取细胞总RNA,合成cDNA,用于qRT-PCR;提取细胞全蛋白进行West... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

MAGED4是miR-200a的潜在靶目标A.筛选miRNA调控因子.B.MAGED4与miR-200a的潜在结合位点.

图 2-1 miR-200a 在胶质瘤细胞株的表达72 组:A172 细胞;U87 组:U87 细胞;U251 组:U25<0.01 为两组间差异有显著统计学意义.条表示平ion in glioma cells.NB group:Normal brain tissue;A1 group:U251 cell line . miR-200a expression was standard deviation from the mean.质瘤细胞中 miR-200a 的表达ics 、Inhibitors 和 ngative contro（ 48h 后检测各组 miR-200a 的相对两者之间，miR-200a 的相对表达量无ock 组，Minics 组 miR-200a 的相对（P＜0.01），说明在细胞中成功上调对表达水平显著降低，差异有统计学

不同 miR-200a 转染 A172 后 miR-200a mRNA性对照组:细胞转染阴性对照;模拟物组:细胞转剂.U6 作为 miR-200a 的内参.与空白组比较, 值的标准偏差.pression in A172 infected different miR-200acells infected with negative control ;Minics groupls infected with miR-200a Inhibitors . miR-200aup. Bars represent standard deviation from the m表 3-2 qRT-PCR 检测 U87 细胞 miR-200a 表达able3-2 qRT-PCR test for miR-200a expression miR-200a Ct 值 ΔCt ΔΔCt 23.74 6.62 - 21.33 5.47 -1.15 25.72 8.03 1.41 23.46 6.53 -0.09


本文编号：2944502