Siah1与Numbl在胶质瘤中的表达及相关性研究

发布时间：2017-04-09 10:07

  本文关键词：Siah1与Numbl在胶质瘤中的表达及相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的1.研究Siah1和Numbl在胶质瘤组织中的表达情况,分析Siah1和Numbl异常表达与胶质瘤发生发展的关系。2.研究胶质瘤细胞增殖和迁移过程中Siah1和Numbl蛋白的表达变化及其机制,探讨Siah1和Numbl在此过程中的作用。方法1.采用western blot技术检测不同级别胶质瘤新鲜组织中Siah1和Numbl的表达情况;运用免疫组化方法检测92例胶质瘤组织石蜡切片中Siah1和Numbl的表达情况,并结合胶质瘤临床病理资料分析Siah1和Numbl与胶质瘤患者的年龄、性别、KPS评分、肿瘤位置、手术切除范围以及肿瘤分级等因素之间的关系,并对其进行随访,应用Kaplan-Meier法分析Siah1和Numbl与胶质瘤预后的关系。构建Siah1、Numbl过表达载体,将Siah1和Numbl转染入U87-MG细胞检测Siah1和Numbl对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。2.通过免疫共沉淀方法证明Siah1和Numbl体外的相互作用;通过免疫荧光检测两者在U87-MG细胞和U251细胞内的共定位;构建Siah1的截短突变体,检测它们相互作用的区段。3.通过将myc标记的Siah1、HA标记Numbl转染胶质瘤细胞,检测Siah1和Numbl的相互作用对Siah1的作用底物β-catenin降解的调节作用。结果1.Western blot分析显示,Siah1和Numbl在胶质瘤组织中的表达随级别增高而降低。免疫组化结果显示,Siah1和Numbl的表达与胶质瘤组织学分级之间有统计学意义(P值分别为0.028、0.022)。Kaplan-Meier分析显示在胶质瘤中Siah1和Numbl的低表达与患者较差的生存预后显著相关(P均0.001)。2.通过构建Siah1和Numbl的过表达载体并转染入U87-MG细胞,结果显示单独过表达Siah1和Numbl对胶质瘤细胞增殖和迁移有抑制作用,共同转染过表达Siah1和Numbl时对胶质瘤细胞增殖和迁移的抑制作用更明显。3.体外HEK293T细胞及胶质瘤细胞中的免疫共沉淀以及免疫荧光显示Siah1和Numbl存在相互作用;通过截短突变检测到两者的相互作用区域发生在Siah1底物结合区SBD段;在胶质瘤细胞中检测到Siah1和Numbl的相互作用协同促进β-catenin的降解。结论1.Siah1和Numbl在胶质瘤中随着级别的升高表达降低,低表达Siah1和Numbl的患者预后较差,Siah1和Numbl的表达呈正相关;2.Siah1和Numbl抑制胶质瘤细胞的增殖与迁移,协同作用比单独对增殖和迁移的作用更加明显;3.Siah1和Numbl存在相互作用,两者协同作用更能降低作用底物β-catenin的量。
【关键词】：胶质瘤 Siah1 Numbl 增殖 迁移
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 绪论11-14
• 1.1 课题来源、研究的目的和意义11
• 1.2 国内外研究概况11-13
• 1.2.1 国外研究概况11-13
• 1.2.2 国内研究概况13
• 1.3 论文的主要研究内容13-14
• 第二章 材料和方法14-31
• 2.1 材料14-17
• 2.1.1 组织标本14
• 2.1.2 细胞来源14
• 2.1.3 主要试剂14-16
• 2.1.4 实验仪器16-17
• 2.2 实验流程与方法17-31
• 2.2.1 western blot17-19
• 2.2.2 免疫组织化学实验19-20
• 2.2.3 细胞免疫荧光实验20
• 2.2.4 RT-PCR20-22
• 2.2.5 Siah1质粒全长、截短突变构建22-25
• 2.2.6 细胞培养25
• 2.2.7 免疫共沉淀25-26
• 2.2.8 CCK8增殖实验26
• 2.2.9 细胞周期流式实验26-27
• 2.2.10 Transwell迁移试验27
• 2.2.11 细胞划痕试验27-28
• 2.2.12 免疫组化结果判断28
• 2.2.13 统计学处理28
• 2.2.14 试剂配制28-31
• 第三章 结果31-43
• 3.1 Siah1和Numbl在胶质瘤中的表达及其临床意义31-36
• 3.1.1 Siah1和Numbl的在胶质瘤组织中的表达随级别升高而降低31-32
• 3.1.2 免疫组化检测Siah1和Numbl在胶质瘤组织中蛋白表达32-35
• 3.1.3 Siah1和Numbl的表达与患者的预后关系35
• 3.1.4 Siah1和Numbl的相关性35-36
• 3.2 Siah1和Numbl对胶质瘤细胞的影响36-39
• 3.2.1 Siah1和Numbl在胶质瘤细胞中的表达36-37
• 3.2.2 Siah1和Numbl转染效率的检测37
• 3.2.3 Siah1和Numbl协同作用抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移37-39
• 3.3 Siah1和Numbl之间的相互作用39-43
• 3.3.1 Siah1和Numbl共定位于细胞浆39-40
• 3.3.2 Siah1和Numbl相互作用的检测40-42
• 3.3.3 Siah1和Numbl之间的协同作用和对β-catenin的影响42-43
• 第四章 讨论43-47
• 4.1 Siah1和Numbl在胶质瘤组织中的表达43-44
• 4.2 Siah1和Numbl对胶质瘤细胞的生物学行为影响44-45
• 4.3 Siah1和Numbl之间的相互关系45-47
• 第五章 结论47-48
• 参考文献48-52
• 英文缩略词表52-53
• 综述53-64
• 综述参考文献60-64
• 在读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目64-65
• A：在国内外刊物上发表的论文64
• B：所参加和主持的项目64-65
• 附录：攻读学位期间获得的主要荣誉65-66
• 致谢66

  本文关键词：Siah1与Numbl在胶质瘤中的表达及相关性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：295002