细胞骨架蛋白Coronin3表达量的变化对U87胶质瘤细胞运动能力影响的研究

发布时间：2021-01-05 21:10

　　[目的]本研究拟通过体外细胞实验探明coronin3表达量的变化,对U87胶质瘤细胞运动能力的影响。[方法]①p EGFP/coronin3真核过表达载体的构建及鉴定:在无菌、无RNA酶污染的条件下利用RNA提取试剂盒提取出U87胶质瘤细胞的总RNA。利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增出coronin3基因的片段,琼脂糖凝胶电泳分析结束后回收纯化PCR产物,提取大肠杆菌质粒,琼脂糖凝胶电泳回收产物与空白质粒pEGFP-N2,将目的基因与质粒同时进行XhoI和BamhI双酶切,两种酶切产物经solution I连接酶作用后,转化入感受态大肠杆菌DH5α,LB琼脂平板培养过夜。经菌落PCR初筛,阳性克隆提取质粒后送昆明硕擎生物技术服务有限公司碱基测序,将碱基测序结果报告与ncbi.Blast软件进行同源性对比分析。②U87细胞的转染和重组基因p EGFP/coronin 3蛋白以及GFP的表达及检测:取纯化的重组质粒p EGFP/coronin 3和空质粒GFP,在脂质体试剂viafect的作用下转染U87细胞。转染24 h后收集细胞,Western blot鉴定重组coronin... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．目的基因ＰＣＲ后琼脂糖凝胶电泳分析??目的基因大小约为１４１３?ｂｐ，由图１可见，在１５００?ｂｐ的位置存在一条明亮的条??带

４７＿?—??图２．质粒ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳分析??质粒ＤＮＡ大小约为４７００?ｂｐ，由图２可见，在大约４７００?ｂｐ的位置存在一条明亮??的条带。??２５??

酶切后的质粒大小约为４６００ｂｐ，酶切后的目的基因大小约为１４００ｂｐ，因此在酶切??后质粒的泳道上在大约４６００ｂｐ左右的位置可见明亮条带，在酶切目的基因的泳??道上在大约１４００ｂｐ左右的位置可见明亮条带。??图４．成功转化的菌落?图５．单克隆菌落??ｍａｋｅｒ?阳性结果?阴性对照??

【参考文献】：
期刊论文
[1]Coronin 1c与肿瘤侵袭和转移相关性研究进展[J]. 范丽媛,李宝生,魏玉梅.  中华肿瘤防治杂志. 2017(12)



本文编号：2959307