PRMT2通过介导组蛋白H3R8me2a参与胶质母细胞瘤中原癌基因激活与肿瘤形成

发布时间：2021-01-07 09:28

　　研究目的胶质母细胞瘤是最常见、也是恶性程度最高的一种星型细胞瘤,平均生存期为15个月。转录调控异常在多形性胶质母细胞瘤中起着重要作用,基于表观遗传修饰的可逆性,寻找关键的表观遗传调控因子对进一步开发靶向治疗策略显得尤为重要。组蛋白赖氨酸甲基化和赖氨酸甲基转移酶的功能及作用机制已经有了深入了解,但是与之相比,蛋白精氨酸甲基转移酶PRMTs家族作为表观遗传因子在肿瘤中的作用还不清楚。本研究拟鉴定在胶质母细胞瘤中起关键作用的PRMT,并系统研究其表观遗传调控机制。研究方法1、通过临床样本的大数据分析（TCGA,CGGA等）,明确蛋白精氨酸甲基转移酶PRMTs与胶质瘤恶性程度、与病人生存期相关性,同时结合临床肿瘤样本染色结果和细胞增殖实验,进一步明确研究目的蛋白为PRMT2。2、利用细胞增殖实验和限度稀释实验,明确PRMT2对胶质母细胞瘤细胞增殖和维持肿瘤干细胞自我更新能力意义;同时构建颅内原位成瘤模型,利用Luciferase成像技术检测敲低PRMT2对肿瘤的生长和荷瘤小鼠生存期的影响。3、利用RNA-seq分析,明确PRMT2降低导致表达下降的基因富集情况,并通过Western Blot和... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

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【学位级别】：博士

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根据TCGA数据库分析蛋白精氨酸甲基转移酶PRMTs家族各成员在不同恶性程度的神经胶质瘤中mRNA水平

10aplan-Meier 生长曲线表示根据 TCGA 数据分析蛋白精氨酸甲基家族各成员 mRNA 水平和神经胶质瘤病人生存期的相关性。确蛋白精氨酸甲基转移酶家族成员对胶质母细胞瘤增殖的影响了解蛋白精氨酸甲基转移酶家族成员对胶质母细胞瘤增殖的影株不同背景的胶质母细胞瘤细胞，分别为 U87（PTEN deleted） WT），U87 是 PTEN 基因缺失的细胞，而 T98G 包含野生型的两株细胞中分别有效地敲低蛋白精氨酸甲基转移酶家族各个成 细胞增值实验验证蛋白精氨酸甲基转移酶是否对细胞增殖所必的增殖实验结果 PRMT2 敲低对细胞增殖抑制均显著，其他蛋酶成员敲低效果因细胞背景差不同差异较大（图 1.3）。因此我T2 作为研究对象，探索其在胶质母细胞瘤的发生或发展中的作

图 1.3 表达相应短发卡 RNA 的两株胶质母细胞瘤细胞系的生长曲线。MTS 实验中时间节点的选择依照相应细胞的生长速度。误差线 error bars 表示 SD，重复数n=3。Western Blot 实验确定 PTEN 基因表达状态。1.2.3 通过对胶质母细胞瘤患者的生存分析和临床组织染色结果明确研究对象PRMT2通过对胶质母细胞瘤患者的生存分析发现，在所有我们分析的数据库（TCGA，CGGA，REMBRANDT）（图 1.4）里 PRMT2 的高表达与病人预后差均有明显的正相关性。同时为了避免因为仅包含 mRNA 表达谱造成实验结果的偏差，我们通过免疫组化的方法检测原代神经胶质细胞瘤中 PRMT2 蛋白表达情况，原代临床样本包括神经胶质细胞瘤不同恶性程度共 21 例。正如图 1.5 所展示，PRMT2 明显富集在高恶性程度的神经胶质细胞瘤的细胞核中。我们根据细胞染色面积和染色强度，对每个临床样本进行打分评估，分析结果显示 PRMT2阳性细胞率和肿瘤恶性程度呈现明显的正相关（图 1.6）。因此，我们得出结论PRMT2 高表达可以用来指示恶性神经胶质细胞的强侵略性。


本文编号：2962312