蟾毒它灵对恶性胶质瘤的作用及机制的研究
发布时间：2021-01-08 20:20
第一部分蟾毒它灵在体外对人胶质瘤细胞的生长抑制作用的评价目的：在体外培养环境下,了解蟾毒它灵对人胶质瘤细胞的增殖抑制作用及IC50浓度区间,初步了解蟾毒它灵对U87细胞侵袭能力和细胞周期的影响。方法：运用XTT法测定蟾毒它灵对U87、U251胶质瘤细胞系生长抑制的量-时-效关系。运用XTT法分别测定不同浓度蟾毒它灵作用于原代培养的人胶质瘤细胞Jz001和JZ002以及人胶质瘤细胞株U87和U251的72小时生长抑制率。正规几率单位法计算蟾毒它灵对每种细胞的IC50。TRANSWELL法测定不同浓度蟾毒它灵对U87细胞侵袭能力的影响。流式细胞技术测定不同浓度蟾毒它灵对U87细胞周期的影响。结果：药物干预后24、48和72小时,各浓度蟾毒它灵对人胶质细胞的增殖抑制作用趋势接近。在体外培养环境下,不同浓度的蟾毒它灵作用72小时对人脑胶质瘤细胞生长抑制活性有较大差异,对Jz001的IC50为0.063ug/ml,对JZ002的IC50为0.084ug/ml,对U87的IC50为0.071ug/ml,对U251的IC50为0.145ug/ml。2-5ug/ml的蟾毒它灵就能明显降低U87细胞的侵...
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
结晶紫染色显示不同浓度蟾毒它灵对U87细胞俊袭能力的影响
溶液轻柔洗涤两遍，ImlO. 25%胰蛋白酶充分湿润细胞培养瓶底面，作用1分钟左右，轻轻摇晃瓶身，细胞层呈小片状脱落，加入5inl完全培养基终止消化，lOral移液管吹打瓶底，所得细胞悬液置入15ml离心管内800转离心5分钟，弃上清，吸取一滴细胞悬液，置于血细胞计数板，并加入台盼蓝染液显微镜下计数，未染色细胞数目测应不低于95%，随后再次800转离心5分钟，弃上清，根据计数结果按比例加入适当体积的无血清DMEM培养液，配置成浓度为0. 5X lOVml的细胞悬液，并置于冰面暂时保存。6.动物模型的建立：小鼠称重后，按照lOOmg/kg腹腔注射稀释后的水合氯醛溶液，待小鼠麻醉成功后，将其固定于脑立体定向注射仪，头皮消毒后，做正中切口约5mm长，暴露矢状缝，冠状缝及前図，取中线旁开2. 3mm,冠状缝前0. 1mm为穿刺点，微型磨钻钻孔一枚，lOul微量进样器抽取5ul细胞悬液，垂直进针，进针深度3. 3誦，后退0.5mm，在多道微量注射菜控制下，以lul/min速度注射细胞悬液，注射完成后，留针5inin，缓慢拔出微量进样器，骨錯封闭穿刺点，术野再次消毒后，4-0丝线缝合手术切口，术毕待小鼠苏醒能自行活动后，放回饲养笼内。
图2-3 a-c小鼠被固定于小动物线圈内11.肿瘤组织的HE和免疫组化染色：小鼠麻醉后行心脏灌注，断头取脑，于4%中性多聚甲醛固定，石錯包埋，做冠状位石錯切片，层厚4脳。11.1石蜡切片的HE染色：(1)切片浸入二甲苯中lOmin;(2)切片浸入二甲苯中lOmin;(3) 100%酒精 Imin。(4) 100%酒精 Imin。(5)95%酒精 Imin。(6) 95%酒精 Imin。(7) 90%酒精 Imin。(8) 80%酒精 Imin。
【参考文献】：
期刊论文
[1]MEK信号通路活化在榄香烯致人源U87MG胶质瘤细胞增殖抑制及G0/G1细胞周期阻滞中的作用[J]. 朱廷准,徐英辉,李晓明,罗力涵,梁国标. 实用药物与临床. 2013(01)
[2]九节龙皂苷衍生物对脑胶质瘤U373细胞株及裸鼠移植瘤的影响[J]. 王荣,校鑫,林瑶,张磊,王晓娟. 中成药. 2012(11)
[3]九节龙皂苷Ⅰ对胶质瘤U87细胞侵袭和迁移的影响[J]. 王琳,王荣,李晓冰,校鑫,钟俊,王晓娟. 中成药. 2012(10)
[4]脑胶质瘤动物模型的研究及应用进展[J]. 朱惠芳,张远旭,赵旭东. 动物学研究. 2012(03)
[5]细胞增殖的检测方法[J]. 石淙,万腊根. 实验与检验医学. 2012(02)
[6]蟾毒它灵的研究进展[J]. 于垂亮,侯惠民. 天然产物研究与开发. 2012(02)
[7]紫杉醇对U373细胞周期阻滞及增殖抑制的机制研究[J]. 魏向阳,涂悦,徐忠伟,孙洪涛,令狐海瑞,陈小义,程世翔,张赛. 中国药理学通报. 2011(04)
[8]大豆异黄酮对C6胶质瘤细胞侵袭力的影响[J]. 田刚,李华,史有才,樊明新,罗云. 中药药理与临床. 2010(01)
[9]SRB法和MTT法抗肿瘤药物筛选结果相关性研究[J]. 黄银久,宋宝安,金林红,胡德禹,杨松,李宁,吴守伟. 生物学杂志. 2009(04)
[10]九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡的实验观察[J]. 玉石,李娟,张晓楠. 现代生物医学进展. 2009(14)
本文编号：2965236
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
结晶紫染色显示不同浓度蟾毒它灵对U87细胞俊袭能力的影响
溶液轻柔洗涤两遍，ImlO. 25%胰蛋白酶充分湿润细胞培养瓶底面，作用1分钟左右，轻轻摇晃瓶身，细胞层呈小片状脱落，加入5inl完全培养基终止消化，lOral移液管吹打瓶底，所得细胞悬液置入15ml离心管内800转离心5分钟，弃上清，吸取一滴细胞悬液，置于血细胞计数板，并加入台盼蓝染液显微镜下计数，未染色细胞数目测应不低于95%，随后再次800转离心5分钟，弃上清，根据计数结果按比例加入适当体积的无血清DMEM培养液，配置成浓度为0. 5X lOVml的细胞悬液，并置于冰面暂时保存。6.动物模型的建立：小鼠称重后，按照lOOmg/kg腹腔注射稀释后的水合氯醛溶液，待小鼠麻醉成功后，将其固定于脑立体定向注射仪，头皮消毒后，做正中切口约5mm长，暴露矢状缝，冠状缝及前図，取中线旁开2. 3mm,冠状缝前0. 1mm为穿刺点，微型磨钻钻孔一枚，lOul微量进样器抽取5ul细胞悬液，垂直进针，进针深度3. 3誦，后退0.5mm，在多道微量注射菜控制下，以lul/min速度注射细胞悬液，注射完成后，留针5inin，缓慢拔出微量进样器，骨錯封闭穿刺点，术野再次消毒后，4-0丝线缝合手术切口，术毕待小鼠苏醒能自行活动后，放回饲养笼内。
图2-3 a-c小鼠被固定于小动物线圈内11.肿瘤组织的HE和免疫组化染色：小鼠麻醉后行心脏灌注，断头取脑，于4%中性多聚甲醛固定，石錯包埋，做冠状位石錯切片，层厚4脳。11.1石蜡切片的HE染色：(1)切片浸入二甲苯中lOmin;(2)切片浸入二甲苯中lOmin;(3) 100%酒精 Imin。(4) 100%酒精 Imin。(5)95%酒精 Imin。(6) 95%酒精 Imin。(7) 90%酒精 Imin。(8) 80%酒精 Imin。
【参考文献】：
期刊论文
[1]MEK信号通路活化在榄香烯致人源U87MG胶质瘤细胞增殖抑制及G0/G1细胞周期阻滞中的作用[J]. 朱廷准,徐英辉,李晓明,罗力涵,梁国标. 实用药物与临床. 2013(01)
[2]九节龙皂苷衍生物对脑胶质瘤U373细胞株及裸鼠移植瘤的影响[J]. 王荣,校鑫,林瑶,张磊,王晓娟. 中成药. 2012(11)
[3]九节龙皂苷Ⅰ对胶质瘤U87细胞侵袭和迁移的影响[J]. 王琳,王荣,李晓冰,校鑫,钟俊,王晓娟. 中成药. 2012(10)
[4]脑胶质瘤动物模型的研究及应用进展[J]. 朱惠芳,张远旭,赵旭东. 动物学研究. 2012(03)
[5]细胞增殖的检测方法[J]. 石淙,万腊根. 实验与检验医学. 2012(02)
[6]蟾毒它灵的研究进展[J]. 于垂亮,侯惠民. 天然产物研究与开发. 2012(02)
[7]紫杉醇对U373细胞周期阻滞及增殖抑制的机制研究[J]. 魏向阳,涂悦,徐忠伟,孙洪涛,令狐海瑞,陈小义,程世翔,张赛. 中国药理学通报. 2011(04)
[8]大豆异黄酮对C6胶质瘤细胞侵袭力的影响[J]. 田刚,李华,史有才,樊明新,罗云. 中药药理与临床. 2010(01)
[9]SRB法和MTT法抗肿瘤药物筛选结果相关性研究[J]. 黄银久,宋宝安,金林红,胡德禹,杨松,李宁,吴守伟. 生物学杂志. 2009(04)
[10]九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡的实验观察[J]. 玉石,李娟,张晓楠. 现代生物医学进展. 2009(14)
本文编号：2965236
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