多巴胺醌的细胞毒性与预防研究

发布时间：2021-01-11 20:22

　　目的：研究多巴胺（Dopamine, DA）对多巴胺细胞的损伤影响和醌氧化还原酶（Quinone oxidoreductase, NQO1）对多巴胺细胞损伤的保护作用,进一步寻求帕金森病发病机理与相关的防治措施。方法：通过改变培养条件和添加细胞因子构建多巴胺细胞模型；运用免疫组织化学方法和免疫荧光方法检测神经元和多巴胺神经细胞的特异性蛋白微管结合蛋白（Microtubule-associated protein2, MAP2）和酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase, TH）;运用单核细胞直接细胞毒性测定（mono-nuclear cell direct cytotoxicity assay, MTT）方法检测多巴胺对细胞活性的影响；运用蛋白质印迹（Western Blot）方法检测细胞内蛋白表达变化情况,并通过醌蛋白检测方法（氯化硝基四氮唑蓝NBT/甘氨酸法）检测不同条件下细胞内的醌化蛋白含量变化；运用腺病毒载体构建高表达NQO1的原代细胞。运用SF诱导整体动物中枢神经系统高表达NQO1并通过脑片免疫组织化学和、Vestern Blot方法检测NQO1的表达量变化。结... 

【文章来源】：华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 细胞模型的建立
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 SHSY5Y细胞系模型的建立
        2.2 原代细胞模型的建立
    3 讨论
第二章 DA对细胞的损伤作用
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 DA对SH-SY5Y细胞和诱导后细胞的毒性影响
        2.2 DA对原代细胞的损伤
    3 讨论
第三章 NQO1对原代神经细胞DA毒性的保护
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 SF预处理后原代TH神经细胞对于DA损伤后的数量变化
        2.2 NQO1蛋白表达量变化的Western Blot检测
        2.3 细胞内醌蛋白检测
        2.4 免疫荧光检测NQO1-腺病毒感染后NQO1表达效果
        2.5 WB检测腺病毒感染细胞系后的表达情况
        2.6 感染NQO1-腺病毒对DA损伤后TH阳性细胞数量的影响
        2.7 原代细胞中NQO1的表达
        2.8 SF诱导后原代细胞中NQO1的表达
        2.9 腺病毒表达后NQO1的阳性细胞以及在细胞中的定位
    3 讨论
第四章 SF在动物水平上的作用
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 SF诱导大鼠脑内NQO1蛋白表达情况
    3 讨论
综述 线粒体损伤和氧化应激
    线粒体呼吸链和氧化有关的问题
    在老年大脑和神经变性疾病中线粒体DNA变化和氧化应激
    在小鼠体内线粒体DNA缺失导致老化和氧化应激
    活性氧对线粒体DNA突变的影响
    复合体Ⅰ,氧化应激和帕金森病
    复合物Ⅰ缺失对在帕金森病中氧化应激和神经变性的影响
    复合物Ⅰ缺失在帕金森病的起源
    结论
全文结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]6-OHDA制作帕金森病大鼠模型及评估[J]. 张伟,杨辉.  四川医学. 2007(08)
[2]帕金森病发病机制的研究[J]. 郝斌,周晓平.  中国药物与临床. 2004(07)
[3]NQO1与肿瘤[J]. 代恩勇.  国外医学.遗传学分册. 2003(03)
[4]NQO1酶及其被氧环境诱导表达的研究进展[J]. 夏小俊,金中初.  生理科学进展. 2002(03)
[5]多巴胺抑制PC12细胞增殖和诱导凋亡作用的研究[J]. 李立宏,高国栋,张宝国,王学廉,李向忠.  中风与神经疾病杂志. 2001(01)



本文编号：2971420