LncRNA-AK039862在百草枯抑制神经细胞增殖及改变Pafah1b1/Foxa1表达中的作用
发布时间：2021-01-17 19:01
目的基于百草枯（PQ）造帕金森（PD）模型小鼠黑质lncRNA表达谱结果,选择lncRNA-AK039862进行研究。于体内动物层面及体外细胞层面中,探讨AK039862在PQ改变神经小胶质细胞或/和多巴胺能神经细胞中Pafah1b1/Foxa1表达变化中的作用。方法体内动物层面:（1）应用已建立的PQ致PD模型的方法,即0、5、10 mg/kg PQ、30 mg/kg 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）染毒小鼠,qRT-PCR验证各组黑质、海马、大脑皮质中AK039862、AK048895表达水平变化（n=4）;（2）应用多重荧光原位杂交,探讨10 mg/kg组中AK039862表达的空间（细胞、亚细胞）分布特征;（3）应用CNC、GO、Pathway、RNA-蛋白质相互作用预测（RPISeq）分析预测并筛选出AK039862潜在靶基因;（4）应用qRT-PCR检测各组黑质中靶基因Pafah1b1/Foxa1的mRNA表达情况（n=4）。体外细胞层面:（1）以0、30、60、90、120μM PQ分别处理bv2细胞24、36、48h,CCK8检测细胞增殖活力（n...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PQ导致多巴胺能细胞损害机制图
福建医科大学硕士学位论文1，是乙酰基水解酶复合体中重要的调节亚基，又称 Lis1，无脑回症蛋白 1)内，转录方向与 Pafah1b1 相反（属于反义链 lncRNA），如下图 2 所示。Pafah1b1 在生命进程中起到至关重要的作用，纯合子缺失会致胚胎死亡，杂合子 Pafah1b1基因敲除小鼠的研究报告显示，小鼠大脑皮层沟回形成受阻，海马区神经元迁移速度减慢[41]。半合子 pafah1b1 由于染色体缺失或点突变可影响神经细胞迁移及有丝分裂，从而引起细胞自发性破裂而导致无脑回症。且在细胞应激（包括氧化应激，缺血，线粒体功能障碍，炎症或疾病）的条件下，lis1 可通过参与 lis1/Ndel1/Dynein 途径诱导 CDK5 异常磷酸化，异常磷酸化的 CDK5 因对 lis1/Ndel1 /Dynein途径的高亲和性而阻断微管中动力蛋白 ATP 依赖性释放，破坏轴突运输线粒体、溶酶体、自噬体等细胞器及信号分子等过程[42]。在诸如 PD 等多种神经退行性疾病均涉及 CDK5 活性失调而涉及神经元存活，迁移和分化，突触发生，突触可塑性和神经递质运输等各种生理及病理的调节过程[43, 44]。
而在神经元发育过程中调控多巴胺能祖母细胞；调控未成熟神经元中 Nurr1（Nr4a2）、engrailed 1 的表达；影响芳香族 L-氨基酸的转运过程，调控成熟神经元中脱羧酶、酪氨酸羟化酶的合成[49]。Foxa1 对于下丘脑基底核发育及功能完整性也是至关重要，Foxa1 基因敲除小鼠会在围产期死亡[50]。综上所述，基于前人的研究成果及本课题组的前期研究成果，我们提出科学假设：百草枯引起的 lncRNA-AK039862 表达改变可能在百草枯诱导的神经细胞损害中发挥着一定的功能作用；lncRNA-AK039862/Pafah1b1/Foxa1 途径在百草枯诱导的小胶质细胞损害中发挥一定的作用；lncRNA-AK039862/Pafah1b1/Foxa1途径在炎症混合培养下的百草枯诱导的多巴胺能神经损害中发挥一定的作用。本课题拟通过 qRT-PCR、基因过表达、基因敲低等技术手段，从体内动物层面和体外细胞层面，探讨 LncRNA-AK039862 在百草枯抑制神经小胶质细胞和多巴胺能细胞神经细胞增殖及改变 Pafah1b1/Foxa1 表达中的作用。本课题技术路线用框图表示如下：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Characterizing and annotating the genome using RNA-seq data[J]. Geng Chen,Tieliu Shi,Leming Shi. Science China（Life Sciences）. 2017(02)
本文编号：2983426
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PQ导致多巴胺能细胞损害机制图
福建医科大学硕士学位论文1，是乙酰基水解酶复合体中重要的调节亚基，又称 Lis1，无脑回症蛋白 1)内，转录方向与 Pafah1b1 相反（属于反义链 lncRNA），如下图 2 所示。Pafah1b1 在生命进程中起到至关重要的作用，纯合子缺失会致胚胎死亡，杂合子 Pafah1b1基因敲除小鼠的研究报告显示，小鼠大脑皮层沟回形成受阻，海马区神经元迁移速度减慢[41]。半合子 pafah1b1 由于染色体缺失或点突变可影响神经细胞迁移及有丝分裂，从而引起细胞自发性破裂而导致无脑回症。且在细胞应激（包括氧化应激，缺血，线粒体功能障碍，炎症或疾病）的条件下，lis1 可通过参与 lis1/Ndel1/Dynein 途径诱导 CDK5 异常磷酸化，异常磷酸化的 CDK5 因对 lis1/Ndel1 /Dynein途径的高亲和性而阻断微管中动力蛋白 ATP 依赖性释放，破坏轴突运输线粒体、溶酶体、自噬体等细胞器及信号分子等过程[42]。在诸如 PD 等多种神经退行性疾病均涉及 CDK5 活性失调而涉及神经元存活，迁移和分化，突触发生，突触可塑性和神经递质运输等各种生理及病理的调节过程[43, 44]。
而在神经元发育过程中调控多巴胺能祖母细胞；调控未成熟神经元中 Nurr1（Nr4a2）、engrailed 1 的表达；影响芳香族 L-氨基酸的转运过程，调控成熟神经元中脱羧酶、酪氨酸羟化酶的合成[49]。Foxa1 对于下丘脑基底核发育及功能完整性也是至关重要，Foxa1 基因敲除小鼠会在围产期死亡[50]。综上所述，基于前人的研究成果及本课题组的前期研究成果，我们提出科学假设：百草枯引起的 lncRNA-AK039862 表达改变可能在百草枯诱导的神经细胞损害中发挥着一定的功能作用；lncRNA-AK039862/Pafah1b1/Foxa1 途径在百草枯诱导的小胶质细胞损害中发挥一定的作用；lncRNA-AK039862/Pafah1b1/Foxa1途径在炎症混合培养下的百草枯诱导的多巴胺能神经损害中发挥一定的作用。本课题拟通过 qRT-PCR、基因过表达、基因敲低等技术手段，从体内动物层面和体外细胞层面，探讨 LncRNA-AK039862 在百草枯抑制神经小胶质细胞和多巴胺能细胞神经细胞增殖及改变 Pafah1b1/Foxa1 表达中的作用。本课题技术路线用框图表示如下：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Characterizing and annotating the genome using RNA-seq data[J]. Geng Chen,Tieliu Shi,Leming Shi. Science China（Life Sciences）. 2017(02)
本文编号：2983426
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/2983426.html
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