LMO3过表达对胶质瘤SHG44细胞生物学功能的影响及机制研究

发布时间：2021-01-23 22:15

　　目的:探究pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro重组慢病毒对胶质瘤SHG44细胞生物学功能的影响及可能作用机制,为防治胶质瘤恶变提供理论依据。方法:1.将LMO3基因构建至p LL3.7-CMV-IRES-puro载体,进行慢病毒的包装,以慢病毒感染胶质瘤SHG44细胞株。嘌呤霉素筛选LMO3双标签过表达稳转株和对照稳转株;2.将细胞分为Control组、Vector组及LMO3组,采用CCK8、EdU试剂盒和流式细胞仪检测胶质瘤SHG44细胞增殖活性和细胞周期分布情况;3.通过细胞迁移实验在显微镜下观察和记录24 h,48 h每一组细胞的伤口愈合情况,判断胶质瘤细胞的迁移能力;4.裸鼠皮下分别接种LMO3组和Vector组胶质瘤SHG44细胞,观察裸鼠成瘤能力及肿瘤质量来评估LMO3表达变化对裸鼠成瘤能力的影响。5.分别用MAPK的激动剂hEGF和抑制剂U0126与PD98059刺激各组胶质瘤SHG44细胞,一部分用于EdU检测hEGF、U0126处理后SHG44细胞的增殖能力;另一部分收集细胞运用Western Blot技术检测LMO3过表达后MEK1、p-MEK1、E... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

LMO3过表达株的鉴定

pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重组慢病毒对 SHG44 细胞(注:与 Control 组比较，*P<0.05) 法检测 pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重组慢病毒CK8 结果，选取贴壁 72 h 后的 SHG44 细胞，EdU 检原理是：荧光染料 Apollo 通过与 EdU 特异性反应，法。结果显示：LMO3 组的细胞阳性率(0.290±33l0.043)，Vector 组(0.413±0.024)表明 LMO3 表达上4 细胞的增殖活性见图 4-3。

图 4-2 pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重组慢病毒对 SHG44 细胞增值率的影响(注:与 Control 组比较，*P<0.05)4.2.2 EdU 法检测 pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重组慢病毒对 SHG44 增殖活性的影响依据 CCK8 结果，选取贴壁 72 h 后的 SHG44 细胞，EdU 检测细胞的增殖能力。其主要原理是：荧光染料 Apollo 通过与 EdU 特异性反应，观察细胞 DNA复制活性的方法。结果显示：LMO3 组的细胞阳性率(0.290±0.043)显著低于Control 组(0.433l0.043)，Vector 组(0.413±0.024)表明 LMO3 表达上调显著抑制了胶质瘤 SHG44 细胞的增殖活性见图 4-3。

【参考文献】：
期刊论文
[1]单纯LIM蛋白在实体瘤中的研究进展[J]. 刘明东,赵忠全,房文铮,欧阳学农.  现代肿瘤医学. 2016(24)
[2]LMO3基因在人脑胶质瘤组织中的表达及意义[J]. 李殿炜,李佳蔚,丁永忠,赵治华,吕同德,杨金升,惠玲.  兰州大学学报(医学版). 2009(03)
[3]LMO3 mRNA在小鼠脑发育过程中的表达[J]. 惠玲,蔡文琴,纪华,吕同德,杨金升,赵治华.  第四军医大学学报. 2006(24)



本文编号：2996018