轻度内质网应激在中枢炎症中的作用及机制研究
发布时间：2021-01-25 17:44
中枢炎症是多种中枢神经系统（Central nervous system,CNS）疾病共同的病理生理通路,可导致突触损伤、神经元结构功能丧失和CNS疾病恶化。脑内胶质细胞的过度激活、促炎因子的过度释放以及血脑屏障（Blood brain barrier,BBB）的损伤是中枢炎症的重要特征。尽管中枢炎症相关性疾病具有完全不同的临床表现,但是机体蛋白质稳态的丧失是其共有的分子病理改变。内质网（Endoplasmic reticulum,ER）是细胞合成、折叠、加工蛋白质的主要场所。一些生理或病理因素均会干扰内质网正常蛋白折叠过程,导致未折叠蛋白或者错误折叠蛋白在ER内聚集,称为内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）,继而启动未折叠蛋白反应（Unfolded protein response,UPR）。既往认为ERS是导致CNS病变的因素之一,但是近期有学者提出了“轻度ERS”的概念,即非损伤性、温和的ERS。轻度ERS未激活UPR下游促凋亡蛋白,只引起UPR上游信号通路分子的活化,因而具有迥然不同的病理生理效应。已有研究报道轻度ERS在脑缺血、帕金森...
【文章来源】：南京医科大学江苏省
【文章页数】：131 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
（A）实验一流程：给予各组大鼠不同浓度TM或者10%DMSO，24小时后处死大鼠，取脑组织
⑤E组（TM+4-PBA+LPS组）：侧脑室给予TM（1.5 μg/μL，2μL）后立即腹腔注射100mg/kg 4-PBA，1小时后腹腔注射500 μg/kg LPS。LPS注射后24小时，处死大鼠，取脑组织，分组和实验流程详见实验流程图2。为了节约大鼠数量，实验一和实验二共用同一组正常组大鼠。
1、低剂量 TM 可以诱导大鼠海马区产生非损伤性的轻度 ERS1.1、低剂量 TM 仅激活 UPR 上游信号通路蛋白，不引起下游凋亡蛋白的升高TM 是一种经典的 ERS 激活剂[19]。在本实验中，侧脑室分别注射 0.3、3 和30 μg TM 来观察不同剂量的 TM 对大鼠海马区 UPR 的激活情况。已知 IRE1α介导的信号通路是 UPR 中最保守的信号通路。与 BiP 解离后，IRE1α自身磷酸化会激活其内切核糖核酸酶活性。磷酸化的 IRE1α可切除非剪接型 X 盒结合蛋白 （Unspliced x-box binding protein 1，XBP1u）上 26 个核苷酸，移动 mRNA 的编码阅读框，使之转化为剪接型 XBP1（XBP1s）。XBP1s 是一种稳定而活跃的转录因子，它的下游基因与蛋白质折叠、内质网相关降解系统、蛋白质翻译、脂质合成等生物学过程有关[8]。为了观察侧脑室注射 TM 后 IRE1α通路的激活情况我们采用 Western Blotting 方法检测 XBP1s、XBP1u 和 p-IRE1α的表达。如图 所示，注射 0.3、3 和 30 μg TM 后，p-IRE1α和 XBP1s 的表达量与正常组相比明显上升，XBP1u 表达量明显降低。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Is autophagy an elective strategy to protect neurons from dysregulated cholesterol metabolism?[J]. Elisa Piscianz,Liza Vecchi Brumatti,Alberto Tommasini,Annalisa Marcuzzi. Neural Regeneration Research. 2019(04)
本文编号：2999625
【文章来源】：南京医科大学江苏省
【文章页数】：131 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
（A）实验一流程：给予各组大鼠不同浓度TM或者10%DMSO，24小时后处死大鼠，取脑组织
⑤E组（TM+4-PBA+LPS组）：侧脑室给予TM（1.5 μg/μL，2μL）后立即腹腔注射100mg/kg 4-PBA，1小时后腹腔注射500 μg/kg LPS。LPS注射后24小时，处死大鼠，取脑组织，分组和实验流程详见实验流程图2。为了节约大鼠数量，实验一和实验二共用同一组正常组大鼠。
1、低剂量 TM 可以诱导大鼠海马区产生非损伤性的轻度 ERS1.1、低剂量 TM 仅激活 UPR 上游信号通路蛋白，不引起下游凋亡蛋白的升高TM 是一种经典的 ERS 激活剂[19]。在本实验中，侧脑室分别注射 0.3、3 和30 μg TM 来观察不同剂量的 TM 对大鼠海马区 UPR 的激活情况。已知 IRE1α介导的信号通路是 UPR 中最保守的信号通路。与 BiP 解离后，IRE1α自身磷酸化会激活其内切核糖核酸酶活性。磷酸化的 IRE1α可切除非剪接型 X 盒结合蛋白 （Unspliced x-box binding protein 1，XBP1u）上 26 个核苷酸，移动 mRNA 的编码阅读框，使之转化为剪接型 XBP1（XBP1s）。XBP1s 是一种稳定而活跃的转录因子，它的下游基因与蛋白质折叠、内质网相关降解系统、蛋白质翻译、脂质合成等生物学过程有关[8]。为了观察侧脑室注射 TM 后 IRE1α通路的激活情况我们采用 Western Blotting 方法检测 XBP1s、XBP1u 和 p-IRE1α的表达。如图 所示，注射 0.3、3 和 30 μg TM 后，p-IRE1α和 XBP1s 的表达量与正常组相比明显上升，XBP1u 表达量明显降低。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Is autophagy an elective strategy to protect neurons from dysregulated cholesterol metabolism?[J]. Elisa Piscianz,Liza Vecchi Brumatti,Alberto Tommasini,Annalisa Marcuzzi. Neural Regeneration Research. 2019(04)
本文编号：2999625
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