中枢神经系统氯稳态失衡参与肝性脑病的机制研究

发布时间：2021-01-30 21:36

　　肝性脑病（hepatic encephalopathy, HE）是由肝功能严重不足引起的神经功能紊乱综合征，是肝病患者最常见的并发症和死亡原因之一。关于其发病机制的学说众多，至今尚未完全阐明，临床上也无特效疗法。HE的运动障碍和中枢神经系统（central nervous system, CNS）内的基底神经节的精细调控状态密切相关。在基底神经节复杂的网络中，黑质网状部（substantia nigra pars reticulate, SNr）是运动调控环路上的关键一环，主要由γ-氨基丁酸（Gamma-amino butyric acid, GABA）能投射神经元组成。研究表明，GABA与HE的脑细胞功能紊乱密切相关，但其作用机制尚不明确。氯离子（Cl^-）是细胞内最重要的阴离子。特别在神经系统，神经元内外氯离子浓度保持相对平衡状态，即形成氯离子稳态，是维持神经元和局部环路形态和机能稳定的内环境基础。氯离子稳态失衡可引起GABA能传递的改变，氯离子稳态及其调控因子已经成为多种GABA相关神经病理性疾病的潜在治疗靶点。研究显示CNS内不同部位的氯稳态失衡参与多种神经... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：127 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
Abstract
前言
文献回顾
实验一 转基因小鼠黑质网状部氯稳态失衡参与肝性脑病的病理过程
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 实验动物
        2.2 主要材料及试剂
        2.3 常用仪器
        2.4 诱导建立ALF和 HE
        2.5 神经功能的评估
        2.6 组织学分析
        2.7 旷场实验检测运动能力
        2.8 组织制备和荧光测量检测细胞内的氯离子浓度
        2.9 实时定量RT-PCR和Western blot组织的制备
        2.10 实时定量RT-PCR
        2.11 Western blot分析
        2.12 双重免疫荧光标记
        2.13 SNr内GABA能神经元亚细胞结构中检测免疫荧光标记 KCC2 表达情况
        2.14 尼氏染色
        2.15 立体定位手术和黑质内注射药物
        2.16 血氨及大脑氨含量的测定
        2.17 大脑含水量测定
        2.18 数据分析
    3 实验结果
        3.1 TAA导致HE和运动迟缓
        3.2 TAA导致SNr内GABA能神经元内的氯离子浓度的增加
        3.3 TAA降低SNr内KCC2的表达及其对GABA能神经元细胞膜的靶向锚定
        3.4 TAA没有改变SNr内神经元数目
        3.5 黑质内注射药物的作用
    4 讨论
实验二 临床检测氯稳态失衡参与肝性脑病的病理过程
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 实验对象
        2.2 主要材料及试剂
        2.3 常用仪器
        2.4 实时定量 RT-PCR 检测
        2.5 血氨的测定
        2.6 数据分析
    3 实验结果
        3.1 实验组和对照组外周血中KCC2和NKCC1 mRNAs水平的比较
        3.2 KCC2、NKCC1 mRNAs水平与患者临床特征之间的关系
        3.3 KCC2、NKCC1 mRNAs水平与患者血氨水平的关系
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：3009627