探究Caspr2对神经元形态和兴奋性的影响

发布时间：2021-02-08 06:10

　　目的:癫痫是由大脑神经元异常放电引起的神经系统疾病,发病过程中神经网络处于兴奋-抑制失衡的状态。癫痫病因有很多,遗传因素为原发性癫痫的主因,脑出血、脑肿瘤、脑外伤、炎症、感染等是导致继发性癫痫发生的常见原因。现已有许多有研究报道CNTNAP2基因的异常与癫痫的发生有关,其编码的蛋白Caspr2参与了中枢神经网络兴奋性的调节过程。我们在临床癫痫病例中亦发现了一个新的突变CNTNAP2（R777G）,我们推测Caspr2很可能参与调节神经系统兴奋-抑制平衡系统,而当发生基因突变时,神经网络兴奋传导异常,很有可能会引起癫痫发生。因此,本研究初步探究Caspr2对神经元形态结构与兴奋性功能的影响,给癫痫发病机制的研究提供理论基础。方法:我们构建了带绿色荧光的人源野生型CNTNAP2基因与突变人源CNTNAP2（R777G）基因的质粒,分别转染至细胞系HEK293T、SH-SY5Y和小鼠原代培养神经元中,通过Western blot与荧光定量PCR检测人源野生型Caspr2与突变蛋白Caspr2（R777G）的表达情况;通过荧光显微镜观察小鼠原代培养神经元过表达野生型Caspr2或突变蛋白Cas... 

【文章来源】：广州中医药大学广东省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 癫痫的研究现状
    1.1 癫痫的定义
    1.2 癫痫的病因
        1.2.1 原发性癫痫
        1.2.2 继发性癫痫
    1.3 癫痫的发病机制
        1.3.1 基因突变与离子通道异常
        1.3.2 神经递质异常
        1.3.3 免疫及炎症因素
        1.3.4 神经胶质细胞
第二章 Caspr2蛋白的研究现状
    2.1 Caspr2的分子结构
    2.2 Caspr2的主要功能
        2.2.1 在髓鞘近结侧区募集Kv1.1、Kv1.2
        2.2.2 参与神经元的迁移
        2.2.3 参与神经网络的正常活动
    2.3 Caspr2在人与鼠脑中的不同分布与表达
    2.4 Caspr2与癫痫联系密切
    2.5 CN7NAP2基因新突变位点及病例背景
第三章 材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 动物及饲养条件
        3.1.2 细胞
        3.1.3 抗体
        3.1.4 化学药品和材料、试剂盒及培养基
        3.1.5 主要试剂与溶液的配制
        3.1.6 主要实验仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 质粒构建
        3.2.2 大量提取无内毒素质粒
        3.2.3 pEGFP-N1-CNTNAP2 （R777G）质粒的构建
        3.2.4 细胞分离及培养
        3.2.5 细胞转染
        3.2.6 蛋白质免疫印迹
        3.2.7 实时荧光定量PCR
        3.2.8 电生理技术
        3.2.9 数据分析
第四章 实验结果与分析
    4.1 质粒构建成功
        4.1.1 pEGFP-N1-CNTNAP2质粒构建
        4.1.2 pEGFP-N1-CNTNAP2 （R777G）质粒构建
    4.2 细胞系转染成功
    4.3 Caspr2与神经元形态异常
    4.4 Caspr2与神经元兴奋性异常
结语
参考文献
附录
致谢
统计学审核证明


【参考文献】：
期刊论文
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[2]脑出血与癫痫[J]. 方圆,陈文武.  河南大学学报(医学版). 2016(03)
[3]癫痫病因及发病机制[J]. 苏艳,赵世刚,杨蕴天,孙丽君.  脑与神经疾病杂志. 2016(04)
[4]脑出血继发性癫痫的临床分析[J]. 张小房,关涛,权鑫.  卒中与神经疾病. 2016(01)
[5]电压门控钠离子通道与癫痫[J]. 周艺,罗朝辉,肖波.  中风与神经疾病杂志. 2015(12)
[6]脑出血后继发性癫痫临床分析[J]. 张俊,袁虎.  中国实用神经疾病杂志. 2015(16)
[7]离子通道与遗传性癫痫[J]. 孔玮晶,姜玉武.  中国实用儿科杂志. 2015(07)
[8]癫痫1568例病因分析[J]. 李秀香,马明轩,杨艳,王月瑕,于淼,王丽,高丽华,阎大奇,樊贺勤.  脑与神经疾病杂志. 2015(03)
[9]10个全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系的SCN1A基因突变筛查研究[J]. 吴光声,高峰,沈征,毛姗姗,沈珏,袁哲峰,李珊.  解放军医学杂志. 2014(10)
[10]癫痫流行病学调查研究[J]. 郭铭花,张敬军.  中华脑科疾病与康复杂志(电子版). 2013(05)

博士论文
[1]儿童特发性全身性癫痫易感基因CACNA1H及GABRB3的分析研究[D]. 刘敏.广西医科大学 2012



本文编号：3023488