脑胶质瘤中ppENK基因启动子区的甲基化状态研究
发布时间：2021-02-12 13:38
目的表观遗传学修饰的DNA甲基化在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。肿瘤细胞的发生常存在多基因的异常甲基化现象，尤其是抑癌基因的高甲基化与脑胶质瘤的发生发展密切相关。本研究旨在采用巢氏聚合酶链反应（nPCR法）和亚硫酸氢盐修饰后测序法（BSP法）方法检测脑胶质瘤组织中候选抑癌基因ppENK基因启动子区的甲基化状态，探讨ppENK基因启动子的异常甲基化水平在脑胶质瘤发生发展中的作用以及与临床病理资料之间的关系。方法采用巢式聚合酶链反应（nested polymerase chain reaction nPCR）方法和亚硫酸氢盐修饰后测序法（Bisulfite sequence polymerase chain reaction BSP），检测32例脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中ppENK基因启动子区CpG岛的甲基化状态。利用所学统计学方法分析ppENK基因启动子的异常甲基化水平与临床病例资料（病理分级、年龄、性别、病理分型）之间的关系。本实验中32例脑胶质瘤标本均经病理证实,术前未进行放疗或化疗。10例正常脑组织标本来源脑外伤颅内减压手术患者。结果10例正常脑组织中未检测到ppENK基因...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：37 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
标本组织DNA提取后对DNA质量进行检测电泳图（1-6标本组织，N1-H2O阴性对照M-DNA片段Marker）
标本组织 DNA 提取后对 DNA 质量进行检测电泳图（1-6 标本组织，N1-H2O M-DNA 片段 Marker） Results of inspection Genomic DNA after extraction quality (1 to 6 were tissues, Ntive water control, Lane M was DNA marker)1 2 3 4 5 6 N1 M1 2 3 4 5 6 N2 M400bp200bp
Fig 2 Results of amplification by electrophoresis (1 to 6 were tissues, N2 were negative watercontrol, Lane M was DNA marker)2.3.4 产物测序结果(Sequencing result)根据 BSP 方法对扩增 PCR 产物进行测序，根据测序结果可确定目的片段内每个 CpG 岛中胞嘧啶(C)的甲基化状态，是目前检测目的基因启动子区 CpG岛甲基化水平的金标准。本实验测序工作由上海生物芯片公司协助完成，主要仪器为 ABI 3730XL 全自动 DNA 测序仪(遗传分析仪)。测序的主要原理：若原基因序列 CpG 岛中的 C 即胞嘧啶发生了甲基化反应，则经亚硫酸氢盐修饰测序后胞嘧啶 C 保持不变(如图 3)；若原基因序列中 CpG 岛未发生甲基化反应，则经亚硫酸氢盐修饰、PCR 扩增和测序后原胞嘧啶 C 转变为胸腺嘧啶 T(如图 4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]P73 P16在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及意义探讨[J]. 郭孝云,凌斌,周颖,范少君,周虎. 安徽医学. 2010(10)
[2]脑胶质瘤中hMLH1基因表达及启动子区的甲基化状态研究[J]. 陈新军,袁先厚,江普查,马超,文志华. 中国临床神经外科杂志. 2010(05)
[3]巢式MSP法检测胃癌患者血浆p16、MGMT基因甲基化[J]. 王燕,周力,陈晓琴,张维,王岚. 世界华人消化杂志. 2010(04)
[4]脑胶质瘤组织中p16基因启动子区CpG岛甲基化检测及其临床意义研究[J]. 侯道荣,马骏,夏龙,徐旭广,张小平,戴有金,温泽锋,郑媛. 现代生物医学进展. 2009(20)
[5]p16、MGMT甲基化在肺癌早期断诊中意义[J]. 张利平,姚群峰,宁勇. 中国公共卫生. 2008(01)
[6]p16基因CpG岛甲基化与胶质瘤生物学特性的关系[J]. 王喆,曹培成,张振兴,王成东,闫红梅,王道奎,王永和,管立学. 中华神经外科疾病研究杂志. 2007(04)
[7]脑胶质瘤中SLC5A8和TMS1/ASC基因启动子区甲基化及mRNA表达的研究[J]. 姜政,李新钢,胡锦,卢大儒,周伟,江玉泉,栗超越. 中华医学杂志. 2007(05)
[8]芯片技术用于APC基因启动子甲基化定量检测[J]. 王贤,潘世扬,陆祖宏,程璐,魏源华,张丽霞,陈丹,张寄南. 临床检验杂志. 2006(03)
[9]Id4基因甲基化在急性白血病微量残留病检测中的意义[J]. 赵瑜,于力,王全顺,李红华,薄剑,王书红,靳海杰,楼方定. 中华血液学杂志. 2006(05)
[10]肝细胞癌MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因甲基化研究[J]. 钱波,朱立新,耿小平,熊奇如,钱叶本,李晓明. 中华普通外科杂志. 2005(05)
本文编号：3030943
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：37 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
标本组织DNA提取后对DNA质量进行检测电泳图（1-6标本组织，N1-H2O阴性对照M-DNA片段Marker）
标本组织 DNA 提取后对 DNA 质量进行检测电泳图（1-6 标本组织，N1-H2O M-DNA 片段 Marker） Results of inspection Genomic DNA after extraction quality (1 to 6 were tissues, Ntive water control, Lane M was DNA marker)1 2 3 4 5 6 N1 M1 2 3 4 5 6 N2 M400bp200bp
Fig 2 Results of amplification by electrophoresis (1 to 6 were tissues, N2 were negative watercontrol, Lane M was DNA marker)2.3.4 产物测序结果(Sequencing result)根据 BSP 方法对扩增 PCR 产物进行测序，根据测序结果可确定目的片段内每个 CpG 岛中胞嘧啶(C)的甲基化状态，是目前检测目的基因启动子区 CpG岛甲基化水平的金标准。本实验测序工作由上海生物芯片公司协助完成，主要仪器为 ABI 3730XL 全自动 DNA 测序仪(遗传分析仪)。测序的主要原理：若原基因序列 CpG 岛中的 C 即胞嘧啶发生了甲基化反应，则经亚硫酸氢盐修饰测序后胞嘧啶 C 保持不变(如图 3)；若原基因序列中 CpG 岛未发生甲基化反应，则经亚硫酸氢盐修饰、PCR 扩增和测序后原胞嘧啶 C 转变为胸腺嘧啶 T(如图 4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]P73 P16在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及意义探讨[J]. 郭孝云,凌斌,周颖,范少君,周虎. 安徽医学. 2010(10)
[2]脑胶质瘤中hMLH1基因表达及启动子区的甲基化状态研究[J]. 陈新军,袁先厚,江普查,马超,文志华. 中国临床神经外科杂志. 2010(05)
[3]巢式MSP法检测胃癌患者血浆p16、MGMT基因甲基化[J]. 王燕,周力,陈晓琴,张维,王岚. 世界华人消化杂志. 2010(04)
[4]脑胶质瘤组织中p16基因启动子区CpG岛甲基化检测及其临床意义研究[J]. 侯道荣,马骏,夏龙,徐旭广,张小平,戴有金,温泽锋,郑媛. 现代生物医学进展. 2009(20)
[5]p16、MGMT甲基化在肺癌早期断诊中意义[J]. 张利平,姚群峰,宁勇. 中国公共卫生. 2008(01)
[6]p16基因CpG岛甲基化与胶质瘤生物学特性的关系[J]. 王喆,曹培成,张振兴,王成东,闫红梅,王道奎,王永和,管立学. 中华神经外科疾病研究杂志. 2007(04)
[7]脑胶质瘤中SLC5A8和TMS1/ASC基因启动子区甲基化及mRNA表达的研究[J]. 姜政,李新钢,胡锦,卢大儒,周伟,江玉泉,栗超越. 中华医学杂志. 2007(05)
[8]芯片技术用于APC基因启动子甲基化定量检测[J]. 王贤,潘世扬,陆祖宏,程璐,魏源华,张丽霞,陈丹,张寄南. 临床检验杂志. 2006(03)
[9]Id4基因甲基化在急性白血病微量残留病检测中的意义[J]. 赵瑜,于力,王全顺,李红华,薄剑,王书红,靳海杰,楼方定. 中华血液学杂志. 2006(05)
[10]肝细胞癌MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因甲基化研究[J]. 钱波,朱立新,耿小平,熊奇如,钱叶本,李晓明. 中华普通外科杂志. 2005(05)
本文编号：3030943
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