MiR-497调控Hif1α诱导EAE小鼠星形胶质细胞生成炎性因子的机制研究

发布时间：2021-02-15 14:27

　　第一部分 EAE模型小鼠脑组织和体外用IL-17刺激星形胶质细胞诱导下调的microRNA及其上调的Hif1α的表达分析目的:探讨EAE模型小鼠的脑组织和体外用IL-17刺激星形胶质细胞后,其microRNA（miRNA）和转录因子,即缺氧诱导因子 1α（hypoxia inducible factor 1α,Hif1α）的表达变化。方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG）注射复制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型并予鉴定,同时在体外培养和鉴定C57BL/6小鼠的原代星形胶质细胞;通过miRNA芯片筛查分析EAE模型小鼠发病14d、20d时脑组织中（体内）及用IL-17刺激小鼠原代星形胶质细胞（体外）后3h、6h,下调miRNA表达谱的变化,并找出体内外共表达下调的miRNA;另在EAE小鼠建模后7d、14d、18d和20d和在IL-17刺激小鼠星形胶质细胞后3h、6h、12h、24h和48h,行Western blot方法... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：106 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２?ＭＯＧ３５＿５５抗原诱导不同时间ＥＡＥ小鼠的神经功能评分情况

ＭＯＧ３５＿５５抗原诱导后１８？２０ｄ的发病高峰期，在ＥＡＥ小鼠脑组织与脊髓组??织中有大量的炎症细胞浸润，尤其在小血管周围呈现典型的“袖套”样改变??（图３Ｂ，Ｄ），但无论是在脑组织还是脊髓组织，ＰＢＳ对照组均未见病理??学的异常改变。提示，小鼠ＥＡＥ模型复制成功。??Ａ?Ｂ?＼?ｙｌ??广？?．?了二?，．，．?入－，?？??图３光镜观察ＥＡＥ小鼠的病理学改变（ＨＥ染色，Ａ、Ｃ、Ｄｘ２００；?Ｂｘ４００）?Ａ．??ＰＢＳ对照小鼠脑组织；Ｂ．?ＥＡＥ小鼠脑组织；Ｃ．?ＰＢＳ对照小鼠的脊髓组织；Ｄ．?ＥＡＥ??小鼠的脊髓组织。??２０??

为了进一步确定ＥＡＥ小鼠髓鞘损伤的情况，我们通过电镜观察了髓鞘??的超微结构改变。结果显示，ＰＢＳ对照组的髓鞘致密、均一；而ＥＡＥ组小??鼠的髓鞘明显损伤，呈现松散、断裂的病理学改变（图４）。??ｍｍ??图４?ＥＡＥ小鼠髓鞘超微结构的改变（Ａ．?ＰＢＳ组；Ｂ．?ＥＡＥ组）。电镜下观察小??鼠髓鞘超微结构的改变显示，ＥＡＥ组小鼠的髓鞘呈现松散、断裂。??二、小鼠星形胶质细胞的原代培养与鉴定??星形胶质细胞经体外传代培养后，置于倒置显微镜下观察，其胞浆丰??富且核浆较少，形状多不规则，胞体分支多，胞核为椭圆形，常常偏于胞??体一侧。用兔抗ＧＦＡＰ多克隆抗体进行免疫细胞化学染色及免疫荧光染色??鉴定，可见培养的星形胶质细胞ＧＦＡＰ的表达定位于胞浆。按照阳性细胞??率（阳性细胞数／总细胞数）ｘｌ〇〇％，每张切片统计５个视野，分别计数阳??性细胞的个数和细胞总数，计算出ＧＦＡＰ阳性率可达９０％以上（图５）。??？系．??２１??

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3035007