吡咯喹啉醌对体外培养的神经干细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2021-02-16 05:52

　　神经退行性疾病（Neurodegenerative disease）是指中枢神经系统组织非正常退变引起的功能缺陷与衰退的一类疾病,病理上表现为脑和脊髓发生神经元变性、丢失。研究发现,机体内过量的自由基产生导致的氧化应激损伤在神经退行性疾病的发病过程中起着重要的作用。近年来,神经干细胞（Neural Stem Cells, NSCs）因其具有自我更新的能力和多向分化潜能,在中枢神经系统再生和重建方面引起广泛关注,但NSCs移植后存活率低和易于受到氧化应激损伤的缺陷,则成为其应用在神经退行性疾病临床治疗上的限制。吡咯喹啉醌（Pyrroloquinline quinone, PQQ）在自然界中广泛存在,作为氧化还原酶的辅基参与机体内的多种氧化还原反应,具有多种生物学功能,尤其是其强大的清除自由基能力和神经营养保护功能已经引起人们的注意。本文首先通过体外悬浮方式培养NSCs,同时采用H2O2和Glu造成细胞氧化应激,以构建NSCs药物损伤模型。结果表明,二者均能对NSCs产生毒性作用,其毒性作用呈时间依赖和浓度依赖；据此,本文分别采用0.35mM H2O2作用细胞24h建立体外NSCs直接氧化... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 神经干细胞
        1.1.1 NSCs的定义
        1.1.2 NSCs的生物学特征
        1.1.3 NSCs的标记与鉴定
        1.1.4 NSCs的培养
        1.1.5 NSCs的应用前景
    1.2 PQQ的研究现状
        1.2.1 PQQ的发现
        1.2.2 PQQ的自然分布
        1.2.3 PQQ的生物学功能
    1.3 氧化应激
        1.3.1 氧化应激的概念
        1.3.2 自由基的产生和清除
        1.3.3 氧化应激与神经退行性疾病
        1.3.4 氧化应激与细胞凋亡
    1.4 小结
2 NSCs的原代分离培养及毒素损伤模型的建立
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验药品
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 NSCs的原代取材及培养
        2.2.2 NSCs的继代培养
        2.2.3 NSCs生长曲线的测定
        2.2.4 NSCs的鉴定
        2.2.5 细胞存活率的检测
50)的计算">        2.2.6 半数致死浓度(LC₅₀)的计算
        2.2.7 统计分析
    2.3 实验结果与讨论
        2.3.1 NSCs的原代及继代培养
        2.3.2 NSCs的生长曲线
        2.3.3 NSCs的免疫组织化学鉴定
2O₂对NSCs细胞存活率的影响">        2.3.4 H₂O₂对NSCs细胞存活率的影响
        2.3.5 Glu对NSCs细胞存活率的影响
    2.4 本章小结
3 PQQ对NSCs自身增殖、凋亡及分化的影响
    3.1 实验材料及方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 溶液配置
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞存活率的检测
        3.2.2 细胞生长曲线的测定
        3.2.3 Hoechst33258染色
        3.2.4 细胞凋亡率的计算
        3.2.5 细胞分化潜能的测定
        3.2.6 统计分析
    3.3 实验结果与讨论
        3.3.1 PQQ对NSCs存活率的影响
        3.3.2 PQQ对NSCs生长曲线的影响
        3.3.3 PQQ对NSCs自发性凋亡的影响
        3.3.4 PQQ对NSCs生长及分化能力的影响
    3.4 本章小结
4 PQQ对体外培养NSCs损伤的保护作用
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验药品及试剂
        4.1.2 溶液配制
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 CCK-8法测定细胞活率
        4.2.2 Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞形态变化
        4.2.3 Annexin V-FITC和PI双染色分析细胞凋亡
        4.2.4 SOD的检测
        4.2.5 CAT的检测
        4.2.6 GSH-Px的检测
        4.2.7 统计分析
    4.3 实验结果与讨论
        4.3.1 PQQ后添加对损伤的NSCs存活率的影响
        4.3.2 PQQ预处理对损伤的NSCs存活率的影响
        4.3.3 PQQ对损伤NSCs的保护作用
        4.3.4 PQQ对损伤NSCs凋亡和坏死的影响
        4.3.5 PQQ对损伤NSCs内抗氧化酶活性变化的影响
    4.4 本章小结
结论
创新点摘要
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]神经退行性疾病和脑损伤的细胞疗法[J]. 马艳,盛卸晃,宋淑亮,吉爱国.  生命的化学. 2011(05)
[2]吡咯喹啉醌研究进展[J]. 杨璐,熊向华,汪建华,张惟材.  生物技术通讯. 2009(06)
[3]神经球内神经干/祖细胞活性与代谢研究[J]. 刘天庆,戴明舒,葛丹,李香琴,马学虎,崔占峰.  大连理工大学学报. 2008(06)
[4]吡咯喹啉醌生物合成研究进展[J]. 王歆,张惟材.  生物技术通讯. 2007(03)
[5]吡咯喹啉醌对培养的鼠海马神经元的促生长作用[J]. 熊顺华,王君,龚坚,曾凡龙.  陕西医学杂志. 2007(05)
[6]吡咯喹啉醌对许旺细胞合成与分泌神经生长因子的影响[J]. 李皓桓,刘世清,彭昊,徐怡,邹祖玉.  中华显微外科杂志. 2005(03)
[7]神经干细胞分化及诱导的研究进展[J]. 张舸,田东萍.  医学研究生学报. 2004(09)
[8]细胞凋亡的概念来源及其研究进展[J]. 方晓阳,盛伟.  生命的化学. 2003(02)
[9]吡咯喹啉醌对苹果花粉萌发和花粉管生长的影响(简报)[J]. 卫秀英,李秀菊,朱坤华.  植物生理学通讯. 2000(04)
[10]医用可生物降解高分子材料[J]. 林建平,吴礼光,岑沛霖.  功能高分子学报. 1996(04)



本文编号：3036284