RhoA在单增李斯特菌以“特洛伊木马”形式穿越血脑屏障中的作用
发布时间：2021-02-18 10:28
目的:单增李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）以―特洛伊木马‖形式穿越血脑屏障这一方式在细菌性脑炎、脑膜炎的发生发展中具有重要意义,其中细胞迁移和突破血脑屏障是必须的,RhoGTP酶家族是调控细胞迁移的关键因子。本研究拟探讨RhoA在该过程中的表达,观察RhoA对细胞迁移和免疫因子的表达等生物学行为的影响。同时研究RhoA调控巨噬细胞对血脑屏障的影响。方法:1.Tranwell小室迁移实验检测RAW264.7带菌迁移能力;实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Lm感染RAW264.7后IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10在mRNA水平和蛋白水平的变化;qRT-PCR和Western blot检测Lm感染RAW264.7后,RhoGTP酶家族在mRNA水平和蛋白水平的表达差异。2.基因干扰技术干扰RhoA在RAW264.7中的表达,并用qRT-PCR和Western blot验证其效率;Transwell迁移实验检测对照组和...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Lm感染促进RAW264.7迁移能力A：Transwell小室迁移结果B：迁移结果计数图（**p＜0.01，***p＜0.001）
图 2.2 Lm 感染促进 RAW264.7 细胞免疫因子的 mRNA 水平的表达IL-10 的相对表达量 B：IL-6 的相对表达量 C：TNF-α 的相对表达量 D：的相对表达量（* p＜0.05，** p＜0.01，*** p＜0.001）re 2.2 Listeria monocytogenes infection promoted mRNA expression of RAW264.7 imfactors Relative expression of IL-10 B: Relative expression of IL-6 C:: Relative expressioTNF-α D: Relative expression of IL-10（* p＜0.05,** p＜0.01,*** p＜0.001）3 Lm 感染促进 IL-1β、IL-6、TNF-α 蛋白水平表达设立无 Lm 刺激组、MOI=1、MOI=10、MOI=100，刺激 9h 后收集上清SA 检测上清中 IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10 蛋白水平的表达。结果如下图所示：IL-1β 和 TNF-α 在蛋白水平的表达随菌量增加显著增加，ILI=100 时显著升高，与对照组比，IL-10 在 Lm 刺激后表达无明显变化。
图 2.3 Lm 感染促进 RAW264.7 细胞因子蛋白水平的表达-1β 蛋白水平的表达 B：IL-6 蛋白水平的表达 C：TNF-α 蛋白水平的表达 D蛋白水平的表达（* p＜0.05，** p＜0.01，*** p＜0.001）re 2.3 Listeria monocytogenes infection promotes the expression of RAW264.7 imfactor proteinsrotein expression of IL-1β B:Protein expression of IL-6 C: Protein expression of TD:Protein expression of IL-10（* p＜0.05,** p＜0.01,*** p＜0.001） qRT-PCR 检测 Lm 感染 RAW264.7 后 RhoGTP 酶家族基因表达下列结果（图 2.4）显示，Lm 感染后，RhoA 和 Rnd1 随菌量的增加而升hoA 的增幅较 Rnd1 明显；RhoB 仅在 MOI=1 时升高 2.5 倍，随菌量的 呈下降趋势；RhoC 在 MOI=100 时升高 1.5 倍左右；RAC1 实验组左右，Cdc42 表达各组间无明显差异。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中耳胆脂瘤中Rock 1和Rock 2的表达研究[J]. 宋少鹏,马秀岚. 听力学及言语疾病杂志. 2019(01)
[2]181例成人社区获得性急性细菌性脑膜炎病原学、临床预后及危险因素分析[J]. 龙芳,陈乾来,吴思颖,刘雅,张为利,廖全凤,王旻晋,陆小军,何超,康梅. 四川大学学报(医学版). 2018(05)
[3]IL-6对卵巢癌细胞迁移和侵袭影响及机制探讨[J]. 方艳惠,赵喜娃,安丽沙. 中华肿瘤防治杂志. 2018(16)
[4]Rho/ROCK signaling in motility and metastasis of gastric cancer[J]. Tasuku Matsuoka,Masakazu Yashiro. World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
[5]动物源性食品存在的问题及对策[J]. 于合宅. 养殖技术顾问. 2014(07)
[6]2000-2009年中国李斯特菌病文献报告病例分析[J]. 冯延芳,冉陆,张立实. 疾病监测. 2011(08)
[7]沉默RhoA基因对骨髓间充质干细胞静脉移植治疗脑梗死大鼠的作用[J]. 周国庆,金怡,张鹏. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(45)
[8]熟肉制品和蔬菜沙拉中单核细胞增生李斯特菌的风险分级评估[J]. 田静,刘秀梅. 中华预防医学杂志. 2009 (09)
[9]儿童感染性脑膜炎后期中CRP、IL-6、TNF的测定的价值[J]. 谢军锦,李书,许红. 中国实用医药. 2008(26)
[10]IL-1β在缺血致脑损伤中的主要作用机制[J]. 陈蔚,邹长江. 生理科学进展. 2002(01)
硕士论文
[1]Rac1载体的构建及其对RAW264.7细胞生物学作用的影响[D]. 彭静静.江苏大学 2017
本文编号：3039431
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Lm感染促进RAW264.7迁移能力A：Transwell小室迁移结果B：迁移结果计数图（**p＜0.01，***p＜0.001）
图 2.2 Lm 感染促进 RAW264.7 细胞免疫因子的 mRNA 水平的表达IL-10 的相对表达量 B：IL-6 的相对表达量 C：TNF-α 的相对表达量 D：的相对表达量（* p＜0.05，** p＜0.01，*** p＜0.001）re 2.2 Listeria monocytogenes infection promoted mRNA expression of RAW264.7 imfactors Relative expression of IL-10 B: Relative expression of IL-6 C:: Relative expressioTNF-α D: Relative expression of IL-10（* p＜0.05,** p＜0.01,*** p＜0.001）3 Lm 感染促进 IL-1β、IL-6、TNF-α 蛋白水平表达设立无 Lm 刺激组、MOI=1、MOI=10、MOI=100，刺激 9h 后收集上清SA 检测上清中 IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10 蛋白水平的表达。结果如下图所示：IL-1β 和 TNF-α 在蛋白水平的表达随菌量增加显著增加，ILI=100 时显著升高，与对照组比，IL-10 在 Lm 刺激后表达无明显变化。
图 2.3 Lm 感染促进 RAW264.7 细胞因子蛋白水平的表达-1β 蛋白水平的表达 B：IL-6 蛋白水平的表达 C：TNF-α 蛋白水平的表达 D蛋白水平的表达（* p＜0.05，** p＜0.01，*** p＜0.001）re 2.3 Listeria monocytogenes infection promotes the expression of RAW264.7 imfactor proteinsrotein expression of IL-1β B:Protein expression of IL-6 C: Protein expression of TD:Protein expression of IL-10（* p＜0.05,** p＜0.01,*** p＜0.001） qRT-PCR 检测 Lm 感染 RAW264.7 后 RhoGTP 酶家族基因表达下列结果（图 2.4）显示，Lm 感染后，RhoA 和 Rnd1 随菌量的增加而升hoA 的增幅较 Rnd1 明显；RhoB 仅在 MOI=1 时升高 2.5 倍，随菌量的 呈下降趋势；RhoC 在 MOI=100 时升高 1.5 倍左右；RAC1 实验组左右，Cdc42 表达各组间无明显差异。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中耳胆脂瘤中Rock 1和Rock 2的表达研究[J]. 宋少鹏,马秀岚. 听力学及言语疾病杂志. 2019(01)
[2]181例成人社区获得性急性细菌性脑膜炎病原学、临床预后及危险因素分析[J]. 龙芳,陈乾来,吴思颖,刘雅,张为利,廖全凤,王旻晋,陆小军,何超,康梅. 四川大学学报(医学版). 2018(05)
[3]IL-6对卵巢癌细胞迁移和侵袭影响及机制探讨[J]. 方艳惠,赵喜娃,安丽沙. 中华肿瘤防治杂志. 2018(16)
[4]Rho/ROCK signaling in motility and metastasis of gastric cancer[J]. Tasuku Matsuoka,Masakazu Yashiro. World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
[5]动物源性食品存在的问题及对策[J]. 于合宅. 养殖技术顾问. 2014(07)
[6]2000-2009年中国李斯特菌病文献报告病例分析[J]. 冯延芳,冉陆,张立实. 疾病监测. 2011(08)
[7]沉默RhoA基因对骨髓间充质干细胞静脉移植治疗脑梗死大鼠的作用[J]. 周国庆,金怡,张鹏. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(45)
[8]熟肉制品和蔬菜沙拉中单核细胞增生李斯特菌的风险分级评估[J]. 田静,刘秀梅. 中华预防医学杂志. 2009 (09)
[9]儿童感染性脑膜炎后期中CRP、IL-6、TNF的测定的价值[J]. 谢军锦,李书,许红. 中国实用医药. 2008(26)
[10]IL-1β在缺血致脑损伤中的主要作用机制[J]. 陈蔚,邹长江. 生理科学进展. 2002(01)
硕士论文
[1]Rac1载体的构建及其对RAW264.7细胞生物学作用的影响[D]. 彭静静.江苏大学 2017
本文编号：3039431
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