GeXP多重RT-PCR技术在病毒性脑炎病原检测中的应用

发布时间：2021-02-21 02:16

　　目的利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种能够同时检测脑炎相关的8种虫媒病毒的多重逆转录-聚合酶链反应（mRT-PCR）方法,并对此方法作出初步评价。方法以脑炎相关的8种虫媒病毒为研究对象,包括版纳病毒（Banna virus,BAV）,乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）,蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus,TBEV）, Tahyna病毒（Tahyna virus,TAHV）,辽宁病毒（Liaoning virus,LNV）,科萨努尔森林病病毒（Kyasanur forest disease virus,KFDV）,辛德毕斯病毒（Sindbis virus,SINV）及云南环状病毒（Yunnan orbivirus,YUOV）并加入小鼠脑脊髓炎病毒（Theiler’s Mouse Encephalomyelitis virus, TMEV）做为内部对照。利用GeXP系统建立多重RT-PCR检测方法,设计各病毒特异引物并进行筛选,以病毒分离培养物和阳性标本来验证引物及多重反应体系的特异性,根据PCR... 

【文章来源】：安徽理工大学安徽省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
插图或附表清单
注释说明清单
引言
1 研究背景
    1.1 GeXP系统的原理及应用
    1.2 病毒性脑炎研究进展
2 病毒性脑炎GeXP多重检测体系的建立
    2.1 试验材料
        2.1.1 病毒来源
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器耗材
    2.2 缓冲液及细菌培养基配置
        2.2.1 核酸电泳缓冲液
        2.2.2 细菌培养基（LB培养基）
    2.3 试验方法
        2.3.1 引物设计
        2.3.2 病毒样品处理
            2.3.2.1 病毒核酸提取前准备
            2.3.2.2 核酸提取
        2.3.3 单引物特异性验证
        2.3.4 构建单克隆质粒
            2.3.4.1 PCR产物纯化
            2.3.4.2 连接
            2.3.4.3 转化
        2.3.5 质粒的提取及线性化
            2.3.5.1 质粒提取
            2.3.5.2 提取质粒线性化
        2.3.6 参考品的制备
            2.3.6.1 体外转录RNA的制备
            2.3.6.2 体外转录后去DNA模板
            2.3.6.3 体外转录后去盐类及核苷酸
        2.3.7 多重检测体系的建立
            2.3.7.1 多重体系特异性验证
            2.3.7.2 多重体系多引物单模板灵敏度分析
            2.3.7.3 多重体系多引物多模板灵敏度分析
        2.3.8 GeXP多重体系验证
    2.4 试验结果
        2.4.1 引物设计
        2.4.2 单引物特异性验证
        2.4.3 质粒的提取及线性化
        2.4.4 多重体系特异性验证
        2.4.5 多重体系多引物单模板灵敏度结果
        2.4.6 多重体系多引物单模板灵敏度结果
        2.4.7 多重体系验证结果
3 实验讨论
结论
参考文献
附录A
后记或致谢
作者简介及读研期间主要科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]GeXP多重PCR技术用于人乳头瘤病毒HPV检测和分型的研究[J]. 芦春斌,杨梦婕,罗乐,王淼,马学军.  中华实验和临床病毒学杂志. 2011 (01)
[2]多重基因表达分析系统在氨基糖苷类多重耐药基因检测中的应用[J]. 胡秀梅,徐邦牢,杨银梅,周小棉,杨梦婕,王淼,马学军.  中华预防医学杂志. 2011 (02)
[3]我国从节肢动物中新分离的虫媒病毒[J]. 冯云,张海林,梁国栋.  中国媒介生物学及控制杂志. 2009(02)
[4]GeXP多重基因表达系统检测外周炎性相关基因方法学探索[J]. 董矜,田亚平,张阳东,李立青.  标记免疫分析与临床. 2009(01)
[5]病毒性脑炎研究进展[J]. 谢艺红,董柏青.  应用预防医学. 2008(06)
[6]Isolation and Complete Genomic Sequence Analysis of a New Sindbis-like Virus[J]. Jing-jing WANG1#, Hai-lin ZHANG2#, Yan-chun CHE1, Li-chun WANG1, Shang-hui MA1, Long-ding LIU1, Yun LIAO1 and Qi-han LI1** (1. Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Kunming 650118, China; 2. Yunnan Institute for Endemic Diseases Control and Prevention, Dali 671000, China).  Virologica Sinica. 2008(01)
[7]什么是GeXP技术?[J]. 温新宇.  中华检验医学杂志. 2007(08)
[8]加强我国病毒性脑炎的监测与研究[J]. 梁国栋.  中华实验和临床病毒学杂志. 2006(03)
[9]引起人类脑炎的新双链RNA病毒[J]. 徐丽宏,梁国栋.  中华实验和临床病毒学杂志. 2006(03)
[10]云南首次分离到辛德毕斯（Sindbis）、巴泰（Batai）和Colti病毒[J]. 张海林,陶三菊,杨冬荣,张云智,杨卫红,章域震,黄文丽,周国林,王环宇,付士红,梁国栋.  中国人兽共患病杂志. 2005(07)



本文编号：3043696