TCF4剪接异构体在胶质瘤细胞系中的表达及功能研究

发布时间：2021-02-28 01:08

　　目的:胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤。高发病率、复发率、死亡率及较低的治愈率是其重要特征。近年来研究表明,Wnt通路的异常调节在胶质瘤生长及恶性进展过程中起到了至关重要的作用。与正常脑组织比较,胶质瘤中β-catenin和TCF4表达均有上调,从而抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。相关研究表明,TCF4在肾癌、结直肠癌、肝细胞癌及脑肿瘤中都存在高表达现象。异常增加的TCF4能够刺激下游靶基因是常见的肿瘤发生的早期事件。人类TCF4基因包含17个外显子。最近的研究表明,TCF mRNA通过可变剪接形成不同的剪接异构体,这与调节Wnt信号通路的转录和肿瘤发生都有相关性。各种类型的癌症包括肾癌、结直肠癌和脑部肿瘤中发现了不同的TCF4剪接异构体。然而,TCF4剪接异构体在神经胶质瘤的发生发展过程中的作用还有待阐明。本实验拟确认三种胶质瘤细胞系中TCF4剪接异构体的种类,并研究三种兴趣异构体对U251细胞系的增殖、凋亡及迁移的影响。方法:我们在含有青霉素（100 U/ml）、链霉素（100 μg/ml）、胎牛血清（10%）的DMEM培养基中成功培养人U251、A172、U-87MG胶质瘤细胞... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：150 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１细胞培养结果（１００Ｘ光镜下）??

ＸＩ??Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ＊－＊??图１－２实验流程图??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｒｏａｄｍａｐ??２．２．２引物序列??Ｐｒｉｍｅｒ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ??Ｒｒ－ＰＣＲ??Ｈ２５ＩＴｃｆ－４（ｃｘｏｎＩ０）?ｆｏｒｗａｒｄ?５＊－ＡＧＴＧＣＡＣＧＴＴＧＡＡＡＧＡＡＡＧＣＧＣＧ－３，??Ｈ２５２?Ｔｃｆ－４?（ｅｘｏｎ?１７ＳＲ）?ｒｅｖｅｒｓｅ?Ｓ＇－ＣＴＧＣＣＴＴＣＡＣＣＴｒＧＴＡＴＧＴＡＧＣＧｖＶ??Ｈ５５７Ｔｃｆ－４（ｅｘｏｎ?！）?ｆｏｒｗａｒｄ?５，＊ＣＴｒＣＣＡＡＡＡｌＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧ－３，??Ｈ５５Ｓ?Ｔｃｆ－４?（ｅｘｏｎ?１！）?ｒｅｖｅｒｓｅ?５ｔ－ＴＣＴＣＴＧＧＡＣＡＧＴＧＣＡＴＧＣＣ－３ｉ??Ｈ５５９?Ｔｃｆ－４?（ｅｘｏｎ?ｉ２）ｆｏｒｗａｕｌ?５ｒ－ＣＡＡＧＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＡＣ－３＇??Ｈ５６２ＴｃＭ?（ｅｘｏｎｌ５）ｆｏ＾ａｒｄ?５＾ＡＴＧＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＡＡＡＧＡＡＧ－３＇??Ｈ５６３?Ｔｃｆ－４?｛ｅｘｏｎ?Ｉ７ＬＲ）?ｒｅｖｅｒｓｅ?５，＊ＴＸ：ＡＧＣＧＡＣＣＡＧＧＡＧＧ０３，??Ｈ５Ｓ０?Ｔｃｆ－４?（ｅｘｏｎ?Ｉ５）ｒｃｖｅｎ；ｅ?５＾ＣＴＧＣＡＣＧＧＴｒＲ］ＣＡＣＣＡＴ－３，??图１－３引物设计序列??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｐｒｉｍｅｒ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ??３５??

Ｆｉｇｕｒｅ?ｌ－６?Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ?ｓｐｌｉｃｉｎｇ?ｉｓｏｆｏｒｍ?ｏｆ?ＴＣＦ４??ＴＣＦ４有１７个外显子，而主要异构体序列的变换在１２号外显子到１７号外??显子之间（图１－６）。因此我们如图１－５所示设计了三对引物（分别为引物Ｈ２５１??和?Ｈ５６３；?Ｈ５５９?和?Ｈ５８０；?Ｈ５６２?和?Ｈ２５２

【参考文献】：
期刊论文
[1]Liquid biopsy of gastric cancer patients:Circulating tumor cells and cell-free nucleic acids[J]. Masahiro Tsujiura,Daisuke Ichikawa,Hirotaka Konishi,Shuhei Komatsu,Atsushi Shiozaki,Eigo Otsuji.  World Journal of Gastroenterology. 2014(12)
[2]胶质瘤干细胞及相关的信号转导通路[J]. 郑克彬,焦保华.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(01)
[3]胶质瘤中Axin和β-catenin表达及临床意义的研究[J]. 潘旭波,郝俊梅,郎志强,于国华,徐振光.  临床和实验医学杂志. 2009(06)



本文编号：3055077