RNA干扰介导泛素连接酶MuRF1和叉头蛋白转录因子FOXO3a基因下调延缓失神经骨骼肌萎缩的体外研究

发布时间：2021-03-01 18:43

　　目的探讨RNAi技术体外抑制MuRF1或FOXO3a基因表达的效果，为RNAi介导的失神经骨骼肌萎缩基因治疗奠定基础。方法订购MuRF-1和FOXO3a两基因的siRNA重组质粒，培养大鼠成肌细胞系L6，将MuRF1和（或）FOXO3asiRNA重组质粒在Lipofectamine2000介导下转染，荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态，于转染后48h与72h，采用实时定量PCR和Westernblot检测siRNA重组质粒对MuRF1和FOXO3a的mRNA和蛋白质水平的抑制效果。结果1.转染后24h，荧光倒置显微镜下观察到细胞中有绿色荧光表达，表明成功将质粒转染到大鼠成肌细胞系L6中。2.实时定量PCR分析结果显示：MuRF1与FOXO3a各自的siRNA重组质粒转染后48h，二者干扰序列在mRNA水平分别明显抑制了MuRF1和FOXO3a的表达，抑制率达67％和54％，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）,联合MuRF1与FOXO3a两基因siRNA重组质粒转染后48h，干扰序列在mRNA水平亦明显抑制了MuRF1及FOXO3a的表达，抑制率达61％及58％，与对照组相... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：38 页

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期刊论文
[1]失神经骨骼肌萎缩中泛素蛋白连接酶Murf1和核转录因子NF-κB表达与被动运动干预[J]. 韩利军,梁炳生,王乐,张磊.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(24)
[2]失神经骨骼肌萎缩与氯沙坦通过核因子κ B/MuRF1通路的延缓作用[J]. 王乐,梁炳生,李文斌,张磊,韩利军,吴启平.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(15)
[3]核转录因子-κB与肌环状指蛋白1在失神经肌萎缩中的表达及意义[J]. 李文斌,梁炳生,梁绪.  中华实验外科杂志. 2010 (04)
[4]失神经骨骼肌萎缩防治研究进展[J]. 李永平,梁炳生.  国际骨科学杂志. 2006(06)



本文编号：3057871