液相芯片技术在病毒性脑炎诊断中的应用研究

发布时间：2021-03-02 22:05

　　病毒性脑炎是中枢神经系统感染中最为常见的疾病之一，其进展迅速，致死致残率高，且由于缺乏明确的诊断方法，给治疗上带来不少难题。不少患者虽然进行抗病毒治疗，却因不能确诊病毒性脑炎或具体由哪一种病毒引起，因此不能有效、及时、准确的进行针对性治疗。为降低该类疾病的死亡率并提高生存率，这就要求临床上对导致疾病的病原体进行快速、准确的检测鉴定。目前的检测方法（如病原体培养、ELISA检测、生化检测等）费时费力或价格昂贵，且每次测试只能检测一种病原体，不能达到同时检测几种病原体的要求。目的：本研究的目的是通过Luminex200悬浮阵列系统，建立一种新的多重PCR快速准确的诊断平台，可高灵敏度、高特异性的同时检测几种病原体。这个平台相较于传统的分离鉴定病原学方法，将会为我们提供更经济的检测，更及时以及更全面的病原学信息。方法：本研究以病毒性脑膜炎和脑炎最为常见的5种病原体（EV71病毒,CA16病毒，ECHO病毒，乙脑病毒以及EB病毒）为研究对象。通过查找GenBank获得5种病原体的特异性基因，用oligo6对其保守序列进行特异性引物设计及探针设计，后BLAST比对筛选，确保所选用的引物及探针特异... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

LuminexxMAP系统和组件[47]

23杂交法示意图[63]。目标 DNA 的 PCR 扩增。一条引物由生杂交等位基因特异性探针与微球耦联，与链霉亲和 R-藻红速测序方法的兴起，大量的信息可被用于帮助确定致病菌种；而同时，临床上，致病微生物导致的疾因此实验室检测病原体的方法也在不断进步当中，，成本少，效益高等方面，一次检测一个目标将逐会是将来实验方法发展的方向。而液相芯片检测系

第四军医大学硕士学位论文制中心馈赠；EB 病毒购买自武汉微生物保藏中心；乙脑病毒Ⅰ型由中国疾病预防控制中心馈赠。2 方法2.1 技术路线简介如图 3 所示，特异性寡核苷酸探针通过 5’端修饰的 NH2与不同光谱地址的微球相结合，作为捕获目的分子部分，生物素标记的目标 DNA 分子PCR 扩增后的产物做为被捕获的分子通过碱基互补原则与探针微球杂交结合，并通过生物素连接一个报告荧光分子，即 streptavidin-RPE。然后通过检测平均荧光值进行定量定性检测。

【参考文献】：
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本文编号：3060036