IKBKE通过激活AKT/NF-KB信号通路调控胶质瘤的生长过程及增强胶质瘤的抗药性

发布时间：2021-03-17 21:15

　　目的:研究证实,IKBKE蛋白表达量与胶质瘤的病理级别成正相关,并且参与胶质瘤的恶性进展。实验研究证实,沉默IKBKE在体内和体外实验中明显抑制胶质瘤细胞的生长。本研究中,通过沉默或过表达IKBKE联合替莫唑胺,探讨在胶质瘤耐药治疗中IKBKE的作用,为下一步应用IKBKE特异性抑制剂联合替莫唑胺治疗胶质瘤提供基础。方法:选择两个经典胶质瘤细胞系LN18和U118,然后相应的沉默或过表达IKBKE,然后通过WB和RT-PCR验证处理后效果。应用EDU及克隆实验方法,形成不同实验处理下替莫唑胺对肿瘤细胞增殖的影响;应用transwell方法检测替莫唑胺药物对胶质瘤细胞系迁移及侵袭能力的影响。在机制研究中,通过免疫印迹的方法,沉默或过表达IKBKE后,检测AKT/NF-KB信号通路的相应蛋白的变化。体内实验研究中,选择高表达IKBKE胶质瘤细胞系LN18,感染luciferase病毒;使用立体定向仪分别建立裸鼠颅内胶质瘤模型,分为无意序列组、无意序列+替莫唑胺组、sh IKBKE组和sh IKBKE+替莫唑胺组;每7天应用生物荧光成像仪检测裸鼠颅内荧光信号,然后根据荧光信号值比较肿瘤大小,... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

多个胶质瘤细胞系中IKBKE蛋白和mRNA的表达量情况

图1.1 多个胶质瘤细胞系中IKBKE蛋白和mRNA的表达量情况Fig. 1.1 expression of IKBKE protein and mRNA in multiple glioma ce根据上述实验结果显示，我们选择 IKBKE 基因表达较高的 LN18对表达量低的 U118 细胞。LN18 细胞分别转染 IKBKE-shRNA 及 NC-病毒，构建 LN18 shIKBKE 实验组和对照组；U118 细胞分别转染 L及 LV-NC 慢病毒，构建 U118 OE-IKBKE 实验组和对照组。然后嘌呤未转染成功的细胞，提取细胞蛋白，然后应用 WB 实验方法技术检测对照组中 IKBKE 蛋白表达量变化情况；LN18 细胞系中，相对于对照组中 IKBKE 蛋白表达量显著降低（图 1.2）；在 U118 细胞系中，实验蛋白表达量显著高于对照组。

实验结果. 1.2 expression of IKBKE protein in sh-IKBKE,LV-IKBKE lentivirus cellsnsfected with LN18 and U118 cell lines, respectivelyRT-PCR实验技术方法，检测实验组与对照组中IKBKE mRNA的变化情结果显示：LN18 细胞系中，相较于对照组，实验组 IKBKEmRNA 表达降低,差异具有统计学意义（p<0.001）；在 U118 细胞系中，实验组 IKBNA 表达量显著高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.001）（图 1.3）。以显示，IKBKE-shIKBKE 慢病毒和 LV-IKBKE 慢病毒干扰 IKBKE 效果明转染效率高。

【参考文献】：
期刊论文
[1]胶质母细胞瘤中表皮生长因子受体和MGMT的改变及其与预后的关系[J]. 张立彦,葛海静,王雷明,赵莉红,刘莉,张德江,蔡彦宁,卢德宏,朴月善.  中华病理学杂志. 2019 (03)
[2]IKKε通过E-cadherin调控人脑胶质瘤迁移和侵袭能力的实验研究[J]. 周西广,杨毅,路捷,南阳,甄英伟,俞凯,王广秀,贾志凡,康春生,黄强.  中华神经外科杂志. 2016 (02)



本文编号：3087727