FoxM1稳定性及其促进Wnt/β-catenin转录活性机制的研究
发布时间：2021-03-19 08:12
恶性星型胶质瘤如多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma multiform, GBM）是最常见和致死性的颅内肿瘤。尽管基础和临床研究积累了一些成果,但目前对其预防和治疗依然具有巨大的挑战。因此,探明恶性星型胶质瘤发生、发展的规律依然是临床和基础研究的重要任务。前期的研究表明FoxM1在脑胶质瘤中高表达,且与胶质瘤的级别呈正相关,与恶性增殖、促血管形成、侵袭等脑胶质瘤的恶性行为有关。最近,我们又发现FoxM1能介导β-catenin的核转位和促进Wnt信号途径下游基因的表达,而维持脑胶质瘤干细胞的自我更新和增强其成瘤性。然而,FoxM1的稳定性及其增强Wnt/β-catenin信号通路的分子机制尚不清楚。本研究目的：（1）明确Wnt信号通路调控FoxM1稳定性的机制;（2）揭示FoxM1增强β-catenin/TCF-4转录活性的机制。研究内容和方法：（1）免疫印迹技术分析Wnt3a及其信号通路抑制剂DKK1对FoxM1稳定性的影响;（2）免疫印迹技术分析GSK-3p表达水平及其活性对FoxM1稳定性的影响;（3）免疫共沉淀技术分析GSK-3β与FoxM1的相互作用;体外激酶实验分...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：98 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 FoxM1的研究现状
1.1.1 FoxM1在个体发育中的作用
1.1.2 FoxM1与脑肿瘤的发生、发展
1.1.3 FoxM1在其他肿瘤中的作用
1.2 Wnt/β-catenin信号通路研究现状
1.2.1 Wnt/β-catenin信号通路是胚胎发育过程中一个重要的信号转导通路
1.2.2 胶质瘤中Wnt/β-catenin信号通路的作用
1.3 Wnt/β-catenin通路抑制因子ICAT
1.4 研究目的和立项依据
1.4.1 研究目的
1.4.2 立项依据
1.5 研究内容和技术路线
1.5.1 研究内容
1.5.2 技术路线
第二章 Wnt信号通路调控FoxM1的稳定性
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 实验结果
2.2.1 Wnt3a调节FoxM1的稳定性
2.2.2 DKK1对FoxM1稳定性的影响
2.2.3 GSK-3β对FoxM1稳定性的影响
2.2.4 FoxM1直接与GSK-3β相互作用
2.2.5 GSK-3β磷酸化FoxM1的位点及降解途径
2.2.6 CK1δ协同GSK-3β磷酸化FoxM1
2.3 讨论
2.4 小结
2.4.1 Wnt信号途径维持了FoxM1在脑胶质瘤细胞内蛋白质水平
2.4.2 GSK-3β通过磷酸化FoxM1上S474位点促进FoxM1经由泛素-蛋白酶体途径降解
2.4.3 FoxM1上S478位点是S474磷酸化的引发位点,CK1δ磷酸化增强S478可以增强S474磷酸化
2.4.4 APC、Axin-1、FoxM1、GSK-3β和CK1δ能形成降解复合物
第三章 FoxM1与ICAT竞争性地与β-catenin结合促进TCF-4的转录活性
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 Wnt3a促进了FoxM1的核转位
3.2.2 FoxM1与 ICAT竞争性地结合β-catenin
3.2.3 FoxM1竞争性地减少了ICAT对β-catenin/TCF-4结合axin2启动子
3.3 讨论
3.4 小结
3.4.1 Wnt信号途径促进了FoxM1的核转位
3.4.2 FoxM1与ICAT竞争性地与β-catenin结合,增强TCF-4的转求活性
3.4.3 FoxM1与ICAT竞争性地与β-catenin结合,影响了TCF-4结合Axin2的能力
3.4.4 FoxM1与ICAT的相互作用影响了Wnt下游基因的cyclinD1和Axin-2的表达
第四章 FoxM1稳定性是驱动细胞周期转换的重要因素
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 仪器
4.1.3 主要试剂和试剂盒
4.2 方法
4.2.1 细胞培养和转染
4.2.2 双荧光素酶报告基因试验
4.2.3 MTT试验
4.2.4 细胞周期同步化和流式细胞仪检测
4.3 结果
4.3.1 FoxM1的升高促进脑胶质瘤细胞的G2/M的进程
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 主要结论和展望
5.1 主要结论
5.2 展望
参考文献
致谢
在读期间已发表论文
本文编号：3089269
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：98 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 FoxM1的研究现状
1.1.1 FoxM1在个体发育中的作用
1.1.2 FoxM1与脑肿瘤的发生、发展
1.1.3 FoxM1在其他肿瘤中的作用
1.2 Wnt/β-catenin信号通路研究现状
1.2.1 Wnt/β-catenin信号通路是胚胎发育过程中一个重要的信号转导通路
1.2.2 胶质瘤中Wnt/β-catenin信号通路的作用
1.3 Wnt/β-catenin通路抑制因子ICAT
1.4 研究目的和立项依据
1.4.1 研究目的
1.4.2 立项依据
1.5 研究内容和技术路线
1.5.1 研究内容
1.5.2 技术路线
第二章 Wnt信号通路调控FoxM1的稳定性
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 实验结果
2.2.1 Wnt3a调节FoxM1的稳定性
2.2.2 DKK1对FoxM1稳定性的影响
2.2.3 GSK-3β对FoxM1稳定性的影响
2.2.4 FoxM1直接与GSK-3β相互作用
2.2.5 GSK-3β磷酸化FoxM1的位点及降解途径
2.2.6 CK1δ协同GSK-3β磷酸化FoxM1
2.3 讨论
2.4 小结
2.4.1 Wnt信号途径维持了FoxM1在脑胶质瘤细胞内蛋白质水平
2.4.2 GSK-3β通过磷酸化FoxM1上S474位点促进FoxM1经由泛素-蛋白酶体途径降解
2.4.3 FoxM1上S478位点是S474磷酸化的引发位点,CK1δ磷酸化增强S478可以增强S474磷酸化
2.4.4 APC、Axin-1、FoxM1、GSK-3β和CK1δ能形成降解复合物
第三章 FoxM1与ICAT竞争性地与β-catenin结合促进TCF-4的转录活性
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 Wnt3a促进了FoxM1的核转位
3.2.2 FoxM1与 ICAT竞争性地结合β-catenin
3.2.3 FoxM1竞争性地减少了ICAT对β-catenin/TCF-4结合axin2启动子
3.3 讨论
3.4 小结
3.4.1 Wnt信号途径促进了FoxM1的核转位
3.4.2 FoxM1与ICAT竞争性地与β-catenin结合,增强TCF-4的转求活性
3.4.3 FoxM1与ICAT竞争性地与β-catenin结合,影响了TCF-4结合Axin2的能力
3.4.4 FoxM1与ICAT的相互作用影响了Wnt下游基因的cyclinD1和Axin-2的表达
第四章 FoxM1稳定性是驱动细胞周期转换的重要因素
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 仪器
4.1.3 主要试剂和试剂盒
4.2 方法
4.2.1 细胞培养和转染
4.2.2 双荧光素酶报告基因试验
4.2.3 MTT试验
4.2.4 细胞周期同步化和流式细胞仪检测
4.3 结果
4.3.1 FoxM1的升高促进脑胶质瘤细胞的G2/M的进程
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 主要结论和展望
5.1 主要结论
5.2 展望
参考文献
致谢
在读期间已发表论文
本文编号：3089269
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