L-DOPA的细胞毒性及其机理研究

发布时间：2017-04-15 20:27

  本文关键词：L-DOPA的细胞毒性及其机理研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究L-DOPA (Levodopa, L-DOPA)对神经细胞增殖损伤影响及醌氧化还原酶(Quinone oxidoreductase, NQO1)对神经细胞损伤的保护作用,进一步探究帕金森病发病机理及相关左旋多巴衰竭综合症防治方法。方法：运用MTT比色法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)检测左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)对神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的增殖损伤影响,检测利血平(Reserpine, RE)与不同浓度左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)共同作用对细胞毒性的影响以及萝卜硫素(Sulforaphane, SF)对不同浓度左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)的细胞毒性影响的保护作用；运用醌蛋白检测法(氯化硝基四氮唑蓝NBT/甘氨酸法)检测左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)、左旋多巴(L-DOPA)与利血平(RE)、左旋多巴(L-DOPA)与萝卜硫素(SF)作用于SH-SY5Y细胞后醌化蛋白含量变化；运用蛋白质印迹(Western Blot)方法检测萝卜硫素(SF)作用SH-SY5Y细胞后,细胞内NQO1的表达量变化；运用乳酸脱氢酶(LDH)还原NADH至NAD+, NADH在340nm有吸光值原理,用酶标仪检测左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)作用SH-SY5Y细胞后乳酸脱氢酶酶活性变化。结果：左旋多巴(Levodopa, L-DOPA)对SH-SY5Y细胞的毒性作用随浓度的增大而对细胞毒性作用增强,在400μmol/L时SH-SY5Y细胞呈现明显损伤,细胞内醌化蛋白含量随L-DOPA作用浓度增加而增加；左旋L-DOPA与利血平(Reserpine, RE)共同作用SH-SY5Y细胞,与相同剂量的单独L-DOPA作用相比,对细胞的毒性作用增大,且细胞内醌化蛋白含量随之增加；L-DOPA作用SH-SY5Y细胞后,细胞内乳酸脱氢酶酶活性下降；萝卜硫素(Sulforaphane, SF)作用SH-SY5Y细胞后,会使胞内NQO1表达量增加,缓解L-DOPA对细胞的毒性作用；SF预处理后与L-DOPA共同作用产生的醌蛋白含量,同L-DOPA单独作用细胞所产生醌蛋白含量相比无明显差异。结论：L-DOPA对SH-SY5Y细胞具有剂量依赖性的毒性效应,随着L-DOPA浓度增加,SH-SY5Y细胞醌化蛋白含量增加,其引起的细胞毒性与胞内醌化蛋白的形成呈一定程度的正相关性；利血平(Reserpine, RE)能够加大L-DOPA的细胞毒性作用,并引起细胞醌蛋白含量进一步增加；L-DOPA能够抑制乳酸脱氢酶活性,推澳L-DOPA作用细胞后使乳酸脱氢酶醌化,进而影响细胞氧化代谢,导致细胞损伤死亡；90μmol/L羟化酪醇(HT)对L-DOPA的细胞毒性影响未见明显的保护作用；SF能诱导产生NQO1,在一定程度上起到对L-DOPA细胞毒性的保护作用。SF对于降低L-DOPA作用SH-SY5Y所产生的醌化蛋白含量并不显著。
【关键词】：SH-SY5Y L-DOPA NQO1 醌蛋白
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.5
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 第一章 L-DOPA对细胞毒性作用研究15-32
• 1 材料和方法17-23
• 1.1 实验材料17-19
• 1.2 实验方法19-23
• 2 结果23-30
• 2.1 L-DOPA对SH-SY5Y细胞的毒性影响23-25
• 2.2 L-DOPA作用SH-SY5Y细胞醌蛋白含量测定25-26
• 2.3 L-DOPA与RE共同作用对SH-SY5Y细胞的毒性作用26-27
• 2.4 L-DOPA与RE共同作用醌蛋白含量测定27-29
• 2.5 酶活性测定29-30
• 3 小结与讨论30-32
• 第二章 对L-DOPA毒性作用的细胞保护研究32-48
• 1 材料和方法33-43
• 1.1 实验材料33-37
• 1.2 实验方法37-43
• 2 结果43-46
• 2.1 对于L-DOPA毒性作用保护药物筛选43-44
• 2.2 SF对L-DOPA毒性作用保护MTT检测44
• 2.3 NQO1蛋白表达量Western Blot检测44-45
• 2.4 SH-SY5Y细胞醌蛋白含量NBT检测45-46
• 3 小结与讨论46-48
• 第三章 综述48-52
• 1 帕金森病48
• 2 左旋多巴衰竭综合症48-49
• 3 羟基酪醇49-50
• 4 萝卜硫素50
• 5 NQO150-52
• 参考文献52-59
• 致谢59-60

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本文编号：309210