ChREBP蛋白通过抑制神经炎症改善神经病理性疼痛的机制研究

发布时间：2021-03-21 18:00

　　研究背景脊髓是疼痛信息传递和整合的初级中枢,脊髓背角小胶质细胞监测到周围神经损伤后迅速激活,释放细胞因子等多种物质,在神经病理性疼痛的发生、发展中发挥关键作用。最近研究报道坐骨神经部分损伤（Spared Nerve Injury,SNI）大鼠脊髓背角转录组测序提示ChREBP的表达增高。但ChREBP的表达增加是否与神经病理性疼痛（Neuropathic Pain,NPP）有关,目前尚未见报道。另有研究发现巨噬细胞中ChREBP蛋白具有显著的抑制炎症作用。那么,巨噬细胞样的小胶质细胞中ChREBP蛋白是否同样具有显著的抗炎作用,脊髓背角ChREBP是否通过调控炎症反应介导NPP的发生发展,目前尚不清楚。本研究以脊髓背角小胶质细胞介导的炎症反应为切入点,通过基因工程技术和生物信息学方法,探究ChREBP在NPP发生发展中的作用及其分子机制,为NPP的治疗提供新的作用靶点。方法第一章:构建并验证SNI诱导机械痛敏的大鼠模型。应用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）、免疫印迹和免疫荧光检测SNI术前、术后患侧L4-L6脊髓背角ChREBP的表达变化,并应用免疫荧光检测脊髓背角ChREBP的... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：136 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１技术路线图??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｔｕｄｙ??

?第一章?ＳＮＩ术后大鼠脊髓背角ＣｈＲＥＢＰ蛋白的表达变化???（图?１－２Ａ）?〇??（３）?ＳＮＩ组术后３天、７天、１４天、２１天同侧的５０％?ＰＷＴ较假手术组同??侧的５０％?ＰＷＴ均显著降低（图１－２Ａ）；而ＳＮＩ组对侧的５０％ＰＷＴ和Ｓｈａｍ组??对侧的５０％ＰＷＴ在术后３天、７天、１４天、２１天均无显著性差异（图１－２Ｂ）。??Ａ?Ｂ??２〇ｉ－－－左－－ＳＮＩ－Ｃｏｎｔｒａ?—ｅ—ＳＮＩ－ｌｐｓｉ?２０－ｉ?Ｓｈａｍ－Ｃｏｎｔｒａ??Ｓｈａｍ－１?ｐｓｉ?＋ＳＮ?卜?Ｃｏｎｔｒａ??Ｓｉ〇．?＼?｜ｉ〇－??Ｑ＿?＼?Ｑ－??＾?．．．?＃＃＃?＃＃＃?＾??ｇ?５．?Ｓ?ｆｌｌ?ｓｉｓ?ＨＩ?ｇ?５－??°?巳Ｌ?３Ｄ?７Ｄ?１４Ｄ?２１Ｄ?°?ＢＬ?３Ｄ?７Ｄ?１４Ｄ?２１Ｄ??图１－２：神经病理性疼痛大鼠ＳＮＩ模型的建立及机械痛敏的观察??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２：?Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ?ｏｆ?ｒａｔｓ?ｏｆ?ＳＮＩ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ?ｐａｉｎ?ａｎｄ?ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ??ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ??图注：Ｖｏｎ?Ｆｒｅｙ实验检测ＳＮＩ术前和术后３天、７天、１４天、２１天的机械痛敏。ＳＮＩ手术??诱发神经损伤同侧后足的机械痛敏（Ａ）；而ＳＮＩ手术对侧或假手术双侧后足的机械痛敏未??发生明显变化（Ｂ）。Ｎ＝５。＊＊＊Ｐ＜０．００１，?ＳＮＩ－ｌｐｓｉ术后各个检测时间点对比术前基线；￥￥￥Ｐ??＜０．００１，?ＳＮＩ－ｌｐｓｉ?对比对应时间点?ＳＮＩ－Ｃｏｎｔｒａ；?＃＃＃Ｐ＜０．００１，?ＳＮＩ－ｌｐｓｉ?对比对应时间点?

…????．…＼????！???￣￣ＳＮＩ造模前￣￣???Ｉ?｜行为学检测??脊髓显微注射后第２?８天??ＳＮＩ造模????＾?Ｗ?—％???〇广〇?ｍ后／天体执祐也?ＳＭ丨术后７天?ＳＮＩ术后３Ｄ、７Ｄ、??ｑ检测ｃｆＳ敲Ｓ?ｑ瞒测炎涵子酸化⑷、■行为学检测??１?７．．．．．．．?．．．．．．????ｉ?－?－．．．．．．．．一１??敲减脊髓背角ＣｈＲＥＢＰ的表达对脊髓背角??炎症水平和机械痛敏的影晌??图２－１技术路线图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｔｕｄｙ??２．２．２大鼠坐骨神经分支选择性损伤模型??同第一章节大鼠坐骨神经分支选择性损伤模型部分。??２．２．３脊髓背角立体定向显微注射??（１）仪器和设备的准备（图２－１）：用移液管显微拉制仪将玻璃拉制移液器??（玻璃电极）的尖端直径拉制为约１００ｐｍ，随后用移液管磨针器将玻璃电极的??尖端磨制为倾斜２５°。预先将显微注射器（适配器）安装连接到显微注射泵控??制器。设置显微注射栗程序，参数如下：注射速度２００ｎＬ／ｍｉｎ，注射时间５ｍｉｎ，??注射总量ｌ＾Ｌ。??３４??


本文编号：3093304