人脑胶质母细胞瘤中巨噬细胞分泌的TNF-α上调SOD-2促进肿瘤细胞迀移、侵袭能力的研究
发布时间：2021-03-28 00:30
目的:胶质母细胞瘤是成人最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,恶性程度高,预后差。近年来研究发现炎症微环境与肿瘤的发生发展密切相关,在胶质母细胞瘤中,炎症微环境中TNF-α与胶质母细胞瘤的临床进程和侵袭性密切相关。我们前期研究发现肺肿瘤炎症微环境中巨噬细胞分泌TNF-α上调SOD-2而促进肿瘤进展。锰超氧化物歧化酶（SOD-2）是氧化应激过程中的重要部分,在不同肿瘤中发挥着的癌基因或抑癌基因作用,介导肿瘤的进展。SOD-2对胶质母细胞瘤迁移、侵袭的作用及机制研究未见报道,肿瘤微环境中TNF-α是否参与调控SOD-2的表达尚不清楚。本研究采用人胶质母细胞瘤标本,探讨SOD-2在胶质母细胞瘤的表达情况及对肿瘤进展的影响;体外培养胶质母细胞瘤细胞以及人单核-巨噬细胞THP-1细胞,探讨巨噬细胞分泌TNF-α对肿瘤细胞SOD-2表达的影响,旨在揭示肿瘤炎症微环境中氧化应激相关蛋白对胶质瘤进展的影响,为胶质瘤的生物靶向治疗提供新的理论依据。方法:1. 采用癌症基因图谱库TCGA（TCGA The Cancer Genome Atlas）,分析了胶质母细胞瘤组织中SOD-2在m RNA水平的表达情况,以及...
【文章来源】：河北医科大学河北省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人类胶质母细胞瘤组织标本SOD-2和TNF-α表达及CD68+巨噬细胞浸润情况
27图2SOD-2对肿瘤细胞U87、U251细胞迁移和侵袭能力的影响Fig.2EffectofSOD-2onmigrationandinvasioninU87andU251cells.U87/U251cellsweretransfectedwithSOD-2siRNAorcontrolsiRNA.ThecellproliferationinbothcellsweremeasuredbyCCK8assay(A),andcloneformationassay(B,C),(twoexperiments,P>0.05,comparedtocontrol).ThemigrationabilityofU87/U251cellstransfectedwithSOD-2siRNAwasmeasuredbywoundhealingassay(D,E)andtranswellmigrationassay(F,G).TheinvasionabilityofU87/U251cellswasmeasuredbytranswellinvasionassay(H,I).TheexpressionofSOD-2,MMP-9,Cyclind-1,SurvivinandTFAMwasmeasuredbyWesternblot(J,K),(fourexperiments,*P<0.05,comparedtocontrol).Datawasshownasmean±SD.3抑制SOD-2表达对胶质母细胞瘤中线粒体功能、糖酵解水平、SOD-2活性、H2O2含量的影响JI
31图4TNF-α刺激对U87和U251细胞系中SOD-2表达及迁移、侵袭的影响Fig.4TNF-αregulatesmigrationandinvasioninU87andU251cellsthroughSOD-2expression.After24hofTNF-αtreatment,theexpressionofSOD-2inU87/U251cellstransfectedwithSOD-2siRNAwasdetectedbyWesternblot(A,B).ThemigrationabilityinbothcellsuponTNF-αtreatmentwasmeasuredbywoundhealingassay(C,D)andtranswellmigrationassay(E,F).TheinvasionabilityofU87/U251cellswasmeasuredbytranswellinvasionassay(G,H).Cellnumberwasdeterminedbycountingthepositivecellsnumberinhigherfieldanddatawasshownasmean±SD(fourexperiments,*P<0.05,*vsControl;#P<0.05,#vscontrolcellstreatedwithTNF-α).5THP-1巨噬细胞分泌TNF-α上调U87、U251细胞系中SOD-2的表达我们体外培养人单核细胞THP-1细胞，先采用PMA在体外刺激THP-1细胞，来获得M0型巨噬细胞，然后采用LPS将THP-1细胞诱导分化为M1型巨噬细胞（Fig.5A），进而取得M0型和M1型巨噬细胞的上清，将其制成条件培养基，刺激U87和U251细胞，Westernblot结果显示，与对照组相比，M0型和M1型巨噬细胞上清上调SOD-2表达，其中M1型巨噬细胞上清诱导U87/U251细胞SOD-2表达高于M0型巨噬细胞上清（Fig.5B，C）。M1型巨噬细胞上清加入TNF-α的中和抗体
本文编号：3104528
【文章来源】：河北医科大学河北省
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人类胶质母细胞瘤组织标本SOD-2和TNF-α表达及CD68+巨噬细胞浸润情况
27图2SOD-2对肿瘤细胞U87、U251细胞迁移和侵袭能力的影响Fig.2EffectofSOD-2onmigrationandinvasioninU87andU251cells.U87/U251cellsweretransfectedwithSOD-2siRNAorcontrolsiRNA.ThecellproliferationinbothcellsweremeasuredbyCCK8assay(A),andcloneformationassay(B,C),(twoexperiments,P>0.05,comparedtocontrol).ThemigrationabilityofU87/U251cellstransfectedwithSOD-2siRNAwasmeasuredbywoundhealingassay(D,E)andtranswellmigrationassay(F,G).TheinvasionabilityofU87/U251cellswasmeasuredbytranswellinvasionassay(H,I).TheexpressionofSOD-2,MMP-9,Cyclind-1,SurvivinandTFAMwasmeasuredbyWesternblot(J,K),(fourexperiments,*P<0.05,comparedtocontrol).Datawasshownasmean±SD.3抑制SOD-2表达对胶质母细胞瘤中线粒体功能、糖酵解水平、SOD-2活性、H2O2含量的影响JI
31图4TNF-α刺激对U87和U251细胞系中SOD-2表达及迁移、侵袭的影响Fig.4TNF-αregulatesmigrationandinvasioninU87andU251cellsthroughSOD-2expression.After24hofTNF-αtreatment,theexpressionofSOD-2inU87/U251cellstransfectedwithSOD-2siRNAwasdetectedbyWesternblot(A,B).ThemigrationabilityinbothcellsuponTNF-αtreatmentwasmeasuredbywoundhealingassay(C,D)andtranswellmigrationassay(E,F).TheinvasionabilityofU87/U251cellswasmeasuredbytranswellinvasionassay(G,H).Cellnumberwasdeterminedbycountingthepositivecellsnumberinhigherfieldanddatawasshownasmean±SD(fourexperiments,*P<0.05,*vsControl;#P<0.05,#vscontrolcellstreatedwithTNF-α).5THP-1巨噬细胞分泌TNF-α上调U87、U251细胞系中SOD-2的表达我们体外培养人单核细胞THP-1细胞，先采用PMA在体外刺激THP-1细胞，来获得M0型巨噬细胞，然后采用LPS将THP-1细胞诱导分化为M1型巨噬细胞（Fig.5A），进而取得M0型和M1型巨噬细胞的上清，将其制成条件培养基，刺激U87和U251细胞，Westernblot结果显示，与对照组相比，M0型和M1型巨噬细胞上清上调SOD-2表达，其中M1型巨噬细胞上清诱导U87/U251细胞SOD-2表达高于M0型巨噬细胞上清（Fig.5B，C）。M1型巨噬细胞上清加入TNF-α的中和抗体
本文编号：3104528
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