波形蛋白干扰RNA对人脑胶质瘤的影响

发布时间：2021-03-30 22:24

　　目的:探讨应用RNA干扰技术敲除波形蛋白（Vimentin,VIM）,在人脑胶质瘤细胞中表达及其对细胞增殖、侵袭、转移等生物学方面的作用,同时也为今后对于胶质瘤疾病的靶向基因治疗等方面提供相应的理论依据。方法:首先利用siRNA（Small interfering RNA,小干扰RNA）设计原则合成VIM干扰RNA的真核表达载体,同时进行测序予以证实。在细胞实验中利用脂质体法转染合成成功的真核表达载体到胶质瘤U251细胞株。利用RT-qPCR（Reverse transcription–qPCR,反转录实时定量PCR）方法检测U251细胞经VIM RNAi（RNA interference,RNA干扰）干扰后VIM的mRNA表达量。将波形蛋白干扰组设为实验组,对照组为转染siRNA阴性对照序列组。最后分别采用MTT法、细胞划痕试验及Transwell小室侵袭试验的方法,观察干扰后肿瘤细胞生长、侵袭及转移能力的改变,实验结果进行对比,从而得出一定的结论。结果:1、成功合成出VIM干扰RNA真核表达载体,并通过检验符合GeneBank数据库序列,并采用脂质体法转染进入至培养的人脑胶质瘤细胞... 

【文章来源】：内蒙古医科大学内蒙古自治区

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

载体设计图谱

VIM-siRNA质粒表达载体部分测序图

图 3ab 转染后的 U251 细胞（荧光显微镜 200×）波形蛋白后 U251 细胞转录水平变化扩增曲线呈“S”形且与其要求的四阶段一致，表明其有效扩增；熔解物与其特异性结合，结果有一定意义。（见图 4）图 4 波形蛋白的扩增曲线及熔解曲线组细胞使用实时荧光定量 PCR 检测 VIM mRNA 相对定量，48 小时 VIM mRNA 转录水平为 0.89±0.07，实验组细胞株 VIM mRNA 表

【参考文献】：
期刊论文
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[3]肿瘤的生物治疗进展[J]. 张勤.  药学服务与研究. 2010(04)
[4]RNA干扰作用的机制及其在肿瘤基因治疗中的应用前景[J]. 张云汉.  郑州大学学报(医学版). 2006(03)



本文编号：3110260