单核细胞趋化蛋白-1在骨髓间充质干细胞向胶质瘤细胞趋化中的作用研究

发布时间：2021-04-17 00:18

　　目的：检测C6胶质瘤细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1以及骨髓间充质干细胞中单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2的表达情况，并探讨单核细胞趋化蛋白-1/CCR2途径是否参与趋化骨髓间充质干细胞向胶质瘤细胞的迁移。方法：1.购买SD雄性大鼠，取股骨与胫骨，分离骨髓间充质干细胞，通过免疫细胞化学检测骨髓间充质干细胞表面标记；2.购买C6胶质瘤细胞，进行传代培养；3.收集C6胶质瘤细胞条件培养液，-20℃保存备用；4.通过PCR对C6胶质瘤细胞中单核细胞趋化蛋白-1的DNA进行定性检测；ELISA检测C6胶质瘤细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1的情况；5.通过PCR对骨髓间充质干细胞中单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2的DNA进行定性检测，免疫细胞化学从蛋白质水平检测骨髓间充质干细胞中单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2的表达；6.应用Transwell体外迁移体系检测骨髓间充质干细胞向C6胶质瘤细胞的迁移效果，实验分三组：A组（C6胶质瘤细胞条件培养液组），B组（C6胶质瘤细胞条件培养液组+单核细胞趋化蛋白-1抗体），C组（无血清LG-DMEM培养液组），计数各组迁移至Transwell趋化板下室中的骨髓间充质... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：35 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

所有照片均放大400倍

11MCP-1 β-actin Marker图2 在658bp处有一条亮带出现，符合单核细胞趋化蛋白-1基因长度。（2） ELISA应用 SPSS 软件分析不同组别单核细胞趋化蛋白-1 浓度的差异，P<0.05，有统计学意义，见表 1。表 1 不同组别 MCP-1 浓度的差异实验组 阴性对照组单核细胞趋化蛋白-1 浓度(pg/ml)11214.133113020.931612349.840612370.125611795.094912573.874529.268277126.306993625.323527525.323527526.306993627.2922739平均单核细胞趋化蛋白-1 浓度(pg/ml)12220.6667 26.6369标准差 632.2064 1.48467Sig. 0.000CCR2 表达（1） PCR骨髓间充质干细胞 DNA 经扩增后，2%琼脂糖凝胶电泳，在 409bp 处有一条亮带出现，符合 CCR2 基因长度

12CCR2 β-actin Marker图3 在409bp处有一条亮带出现，符合CCR2基因长度。（2） 免疫细胞化学免疫细胞化学检测 CCR2 表达，结果显示阴性对照组细胞核呈蓝色，细胞质与细胞膜未着色；CCR2A 与 CCR2B（CCR2 两个亚型）呈阳性表达，细胞核呈蓝色，细胞质与细胞膜呈棕黄色，见图 4。A B C图 4 所有照片均放大 400 倍。A：阴性对照组，细胞核呈蓝色，细胞质与细胞膜未着色；B：CCR2A 表达阳性，细胞核蓝色，细胞质与细胞膜呈棕黄色；C:CCR2B表达阳性，细胞核呈蓝色，细胞质与细胞膜呈棕黄色。Transwell 趋化实验应用 SPSS 软件分析不同组别下室中骨髓间充质干细胞数的差异：A 组与 B组比较


本文编号：3142441