小鼠外周神经损伤后IL-6调控DRG内Oprm1启动子甲基化修饰的分子机制研究

发布时间：2021-04-18 21:01

　　目的:神经病理性疼痛是一种神经系统原发损害或功能障碍引起的慢性疼痛疾病,严重影响患者生活质量。多种不同的损伤,如外伤、神经损伤或感染都可引起神经病理性疼痛。研究显示,表观遗传学机制参与神经病理性疼痛,且神经系统和免疫系统的相互作用可能是疼痛慢性化的关键。神经损伤后DRG内MOR基因启动子区受到DNA甲基化修饰的调控,MOR表达降低,减少阿片药物的作用靶点,使阿片药物对神经病理性疼痛小鼠的镇痛效应降低。IL-6可通过上调DNMT的表达促进多种抑癌基因启动子区域甲基化增强,抑制多种抑癌基因的表达。多项研究表明,IL-6可能在神经病理性疼痛的发展中发挥关键作用。因此,我们提出以下假说:外周神经损伤引起IL-6表达上调,并与IL-6R结合,激活IL-6经典信号通路,上调DNMT3a的表达,促进初级感觉神经元MOR基因启动子区甲基化,使MOR蛋白表达降低并减弱吗啡的镇痛效应。本课题旨在确定坐骨神经损伤后的神经病理性疼痛模型DRG中涉及神经免疫相互作用的内源性IL-6和MOR之间的关系。方法:我们应用分子生物学检测技术在动物和细胞中进行如下实验:第一部分:观察CCI模型小鼠DRG中IL-6和DNM... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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图１．１?ＣＣＩ组及Ｓｈａｍ组小鼠术后７天痛行为学

Ｔｉｍｅ?ａｆｔｅｒ?ｓｕｒｇｅｒｙ?（ｄ）?Ｔｉｍｅ?ａｆｔｅｒ?ｓｕｒｇｅｒｙ?（ｄ）??图１．１?ＣＣＩ组及Ｓｈａｍ组小鼠术后７天痛行为学。两组均在造模前及造模后１天，??３?天，５?天，７?天测量?ＰＷＬ?（Ａ）和?ＰＷＴ?（Ｂ）。＊Ｐ＜０．００５，＊＊户＜０．０１，与?Ｓｈａｍ??组比较，ｎ?＝?６。??３．３?ＣＣＩ组及Ｓｈａｍ组小鼠ＤＲＧ中ＭＯＲ，ＤＮＭＴ３ａ及ＩＬ－６表达变??化??我们应用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ技术检测ＣＣＩ组及Ｓｈａｍ组小鼠ＤＲＧ中ＭＯＲ和??ＤＮＭＴ３ａ蛋白的表达水平。正如先前的研究所证实的那样［１６，２８］，与对照组相比，??小鼠外周神经损伤后，损伤侧ＤＲＧ中ＭＯＲ的表达显著降低（ｐ＜０．０１，图１．２Ａ，??Ｃ）。相反地，ＤＮＭＴ３ａ蛋白（图１．２Ｂ，?Ｄ）和ＩＬ－６ｍＲＮＡ?（图１．３）在损伤侧ＤＲＧ??均明显升高（／？＜０．０１）。免疫荧光显示ＭＯＲ和ＤＮＭＴ３ａ与神经元共定位，ＭＯＲ??主要分布于细胞膜上

ＭＯＲ的下调。我们通过鞘内注射ＤＮＡ甲基转移酶抑制剂５－ａｚａ－ｄＣ抑制ＤＮＭＴ３ａ??的活性。与ＤＭＳＯ组相比，ＣＣＩ小鼠鞘内注射５－ａｚａ－ｄＣ后，损伤侧ＤＲＧ中ＭＯＲ??的表达显著增加（芦＜０．０５，图１．５Ａ，?Ｂ）?，?ＤＮＭＴ３ａ的表达明显减少（ｐ＜０．０１，??图１．５Ａ，?Ｃ）。正常小鼠鞘内注射５－ａｚａ－ｄＣ或ＤＭＳＯ对小鼠ＰＷＬ和ＰＷＴ均无影??响。ＣＣＩ模型小鼠鞘内注射５－ａｚａ－ｄＣ可以增强吗啡的镇痛效应（／？?＜０．０５，图１．６）。??我们同时检测了?ＤＲＧ中ＩＬ－６?ｍＲＮＡ的表达，发现给予５－ａｚａ－ｄＣ后ＤＲＧ中ＩＬ－６??ｍＲＮＡ并没有明显变化（图１．７）。??２０??


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