MiR-150和RNA结合蛋白DAZAP1调控脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的分子机制研究
发布时间：2021-04-19 03:33
目的:脑胶质瘤是成人最常见的原发性颅内肿瘤之一。分子靶向的研究成为目前脑胶质瘤治疗学研究的热点之一。本研究旨在研究微小RNA miR-150和RNA结合蛋白DAZAP1能否调控胶质瘤细胞的恶性生物学行为,进一步深入的分析其可能的分子机制,即mi R-150通过下调FOXB1抑制MMP-9和XIAP的表达,抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为;DAZAP1通过稳定长链非编码RNA00598（Linc00598）的表达下调FOXE1的表达,抑制胶质瘤细胞的恶行生物学行为。本研究旨在为胶质瘤的发生发展提供新的依据,同时为胶质瘤的分子靶向治疗提供新靶标。研究方法:首先培养人的胶质瘤细胞U87、U251,人正常星型胶质细胞。应用Real-time PCR检测miR-150、FOXB1、DAZAP1、Linc00598、FOXE1,应用Western blot检测FOXB1、DAZAP1、FOXE1在正常脑组织、胶质瘤组织、人正常星型胶质细胞中的表达水平。应用CCK-8检测细胞增殖能力的改变。采用Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的改变。应用流式细胞仪和PI-FITC双染色检测细胞凋亡能力。应用...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 ：MiR-150负性调控FOXB1影响脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的分子机制研究
1 前言
2 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 实验用脑组织及细胞株
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 细胞转染
2.2.3 双荧光素酶报告基因检测
2.2.4 CCK-8检测细胞活力
2.2.5 细胞Transwell迁移和侵袭实验
2.2.6 细胞凋亡实验
2.2.7 Real-timePCR
2.2.8 WesternBlot方法检测FOXB1、XIAP、MMP-9蛋白的表达变化
2.2.9 裸鼠移植瘤模型
2.3 实验统计方法
3 实验结果
3.1 MiR-150的内源性表达以及对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响
3.2 FOXB1是miR-150的靶基因
3.3 miR-150通过负性调控FOXB1影响胶质瘤细胞生物学行为
3.4 过表达miR-150和FOXB1调控MMP9和XIAP的表达
3.5 FOXB1与XIAP和MMP-9的启动子区结合
3.6 过表达miR-150和沉默FOXB1抑制裸鼠移植瘤生长
4 讨论
5 结论
第二部分 ：DAZAP1/Linc00598/FOXE1通路调控胶质瘤细胞的恶性生物学行为的分子机制研究
1 前言
2 材料和方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 实验动物
2.1.2 细胞株
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 细胞增殖实验
2.2.3 细胞迁移实验
2.2.4 细胞转染
2.2.5 细胞凋亡实验
2.2.6 双荧光素酶报告基因系统检测
2.2.7 Westernblot
2.2.8 Real-timePCR
2.2.9 RNA结合蛋白免疫沉淀法（RIP）实验
2.2.10 半衰期实验
2.2.11 实验统计方法
3 实验结果
3.1 DAZAP1在胶质瘤细胞中发挥抑癌基因作用
3.2 Linc00598在胶质瘤组织中低表达,起抑癌基因作用
3.3 过表达DAZAP1增加Linc00598的稳定性,抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为
3.4 Linc00598通过负性调控FOXE1,进而影响胶质瘤细胞的生物学行为
3.5 FOXE1促进MARK4的表达,促进胶质瘤细胞的恶性生物学行为
3.6 Linc00598靶向结合FOXE1,进而影响胶质瘤恶性生物学行为
3.7 过表达DAZAP1和Linc00598以及联合应用沉默FOXE1显著抑制裸鼠移植瘤生长，延长其生存期
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
本文编号：3146748
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 ：MiR-150负性调控FOXB1影响脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的分子机制研究
1 前言
2 材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 实验用脑组织及细胞株
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 细胞转染
2.2.3 双荧光素酶报告基因检测
2.2.4 CCK-8检测细胞活力
2.2.5 细胞Transwell迁移和侵袭实验
2.2.6 细胞凋亡实验
2.2.7 Real-timePCR
2.2.8 WesternBlot方法检测FOXB1、XIAP、MMP-9蛋白的表达变化
2.2.9 裸鼠移植瘤模型
2.3 实验统计方法
3 实验结果
3.1 MiR-150的内源性表达以及对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响
3.2 FOXB1是miR-150的靶基因
3.3 miR-150通过负性调控FOXB1影响胶质瘤细胞生物学行为
3.4 过表达miR-150和FOXB1调控MMP9和XIAP的表达
3.5 FOXB1与XIAP和MMP-9的启动子区结合
3.6 过表达miR-150和沉默FOXB1抑制裸鼠移植瘤生长
4 讨论
5 结论
第二部分 ：DAZAP1/Linc00598/FOXE1通路调控胶质瘤细胞的恶性生物学行为的分子机制研究
1 前言
2 材料和方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 实验动物
2.1.2 细胞株
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 细胞增殖实验
2.2.3 细胞迁移实验
2.2.4 细胞转染
2.2.5 细胞凋亡实验
2.2.6 双荧光素酶报告基因系统检测
2.2.7 Westernblot
2.2.8 Real-timePCR
2.2.9 RNA结合蛋白免疫沉淀法（RIP）实验
2.2.10 半衰期实验
2.2.11 实验统计方法
3 实验结果
3.1 DAZAP1在胶质瘤细胞中发挥抑癌基因作用
3.2 Linc00598在胶质瘤组织中低表达,起抑癌基因作用
3.3 过表达DAZAP1增加Linc00598的稳定性,抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为
3.4 Linc00598通过负性调控FOXE1,进而影响胶质瘤细胞的生物学行为
3.5 FOXE1促进MARK4的表达,促进胶质瘤细胞的恶性生物学行为
3.6 Linc00598靶向结合FOXE1,进而影响胶质瘤恶性生物学行为
3.7 过表达DAZAP1和Linc00598以及联合应用沉默FOXE1显著抑制裸鼠移植瘤生长，延长其生存期
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
本文编号：3146748
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/3146748.html
最近更新
教材专著
