西尼罗病毒NS1蛋白对乙型脑炎病毒交叉保护作用研究

发布时间：2021-04-22 14:19

　　西尼罗病毒（West Nile virus, WNV）与乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是一类重要的人兽共患病病原。NS1（Nonstructural protein1）是一个极其重要的非结构蛋白，可以在病毒感染动物体内产生非中和活性抗体并为动物提供有效的免疫保护。因此，确定WNV NS1蛋白的免疫分子基础以及对JEV的交叉保护效果，可以为临床WNV与JEV感染诊断以及黄病毒交叉保护性疫苗的研制做好技术储备，具有重要的意义。本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达WNV NS1蛋白，纯化后经WB（Western blot）证实所表达的蛋白具有良好的生物学活性。利用之免疫Balb/c小鼠，获得8株鼠源单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAbs）以及多克隆抗体（polyclonal antibodies, pAbs）；同时将WNV NS1蛋白截短表达为35条互相重叠6个氨基酸（aa）的麦芽糖结合蛋白（MBP）融合16肽。利用上述材料以及WB和ELISA对WNV NS1蛋白的鼠源表位图谱进行鉴定，结果显示：利用... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：69 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 WNV 概览
        1.1.1 WNV 分类
        1.1.2 WNV 基因组结构与复制
        1.1.3 WNV 分子流行病学
        1.1.4 WNV 致病性及分布
        1.1.5 WNV 的传播
    1.2 WNV 编码蛋白质及其功能
        1.2.1 C 蛋白
        1.2.2 prM 蛋白
        1.2.3 E 蛋白
        1.2.4 NS1 蛋白
        1.2.5 NS2A、NS2B、NS4A 和 NS4B 蛋白
        1.2.6 NS3 蛋白
        1.2.7 NS5 蛋白
    1.3 JE 血清群病毒交叉保护研究进展
        1.3.1 JE 血清群病毒的全球分布及其传播
        1.3.2 JE 血清群病毒交叉保护免疫的可行性
        1.3.3 JE 血清群病毒疫苗所产生的交叉保护性免疫效果
        1.3.4 JE 血清群病毒疫苗免疫对该群异源病毒攻击产生的危害性
    1.4 黄病毒 NS1 蛋白在疾病预防治疗方面的应用及其分子基础
    1.5 本研究的目的与意义
第二章 WNV NS1 蛋白 pAbs 与 mAb 制备及表位图谱绘制
    2.1 实验材料与方法
        2.1.1 细胞、质粒、血清样品、病毒和实验动物
        2.1.2 重组 NS1 蛋白表达纯化以及生物学活性鉴定
        2.1.3 WNV NS1 蛋白鼠源 pAbs 制备
        2.1.4 WNV NS1 蛋白 mAb 的制备以及鉴定
        2.1.5 WNV NS1 蛋白截短表达
        2.1.6 WNV NS1 蛋白鼠源表位图谱绘制
        2.1.7 表位特异性鉴定
        2.1.8 WNV NS1 蛋白特异性 B 细胞表位的保守性分析
    2.2 结果
        2.2.1 NS1 蛋白 mAb 的制备与鉴定
        2.2.2 NS1 蛋白特异性 mAb 的表位鉴定
        2.2.3 利用鼠源 pAbs 全面扫描 NS1 蛋白上的线性 B 细胞表位
        2.2.4 表位特异性鉴定
        2.2.5 WNV 特异性 B 细胞表位的保守性分析
    2.3 本章小结
    2.4 本章讨论
第三章 WNV NS1 蛋白禽源优势表位图谱绘制
    3.1 实验材料与方法
        3.1.1 实验动物、NS1 蛋白及 MBP 融合多肽
        3.1.2 禽源 pAbs 制备与鉴定
        3.1.3 利用 WB 全面扫描 NS1 蛋白禽源表位图谱
        3.1.4 利用 ELISA 进一步确定所鉴定的禽源表位
        3.1.5 三个共有表位的特异性分析
    3.2 结果
        3.2.1 禽源 pAbs 抗体滴度测定
        3.2.2 WNV NS1 蛋白禽源表位图谱绘制
        3.2.3 利用合成肽再次确定所鉴定的线性 B 细胞表位
        3.2.4 禽源共有优势表位特异性分析
    3.3 本章小结
    3.4 本章讨论
第四章 WNV NS1 蛋白对 JEV 的交叉保护作用
    4.1 实验材料与方法
        4.1.1 实验动物、病毒、NS1 蛋白与 MBP 融合多肽
        4.1.2 NS1 蛋白免疫程序以及血清抗体监测
        4.1.3 JEV 攻毒实验以及保护力评价
        4.1.4 攻毒后存活成年鼠血清抗体检测
    4.2 结果
        4.2.1 WNV NS1 蛋白对 JEV 的交叉保护作用
        4.2.2 存活成年鼠血清中和抗体效价测定
        4.2.3 存活成年鼠血清抗体与 WNV NS1 蛋白交叉表位扫描
    4.3 本章小结
    4.4 本章讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3153925