不同浓度米诺环素对人胶质瘤细胞增殖、自噬、凋亡的影响及其机制

发布时间：2021-04-23 16:05

　　目的探讨不同浓度米诺环素对人类胶质瘤U87和LN229细胞增殖及凋亡的影响和作用机制。方法（1）U87和LN229细胞设对照组（DMSO处理）,5μmol/L米诺环素组和10μmol/L米诺环素组,分组处理72 h后采用MTT法检测细胞增殖水平,免疫荧光标记检测细胞自噬蛋白微管相关蛋白l轻链3B亚基（LC3B）表达水平,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达变化。（2）构建沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）-shRNA载体,观察敲低SIRT1表达后,不同浓度米诺环素对U87和LN229细胞自噬的影响。结果 （1）与对照组相比,5μmol/L和10μmol/L米诺环素组细胞增殖能力下降,免疫荧光标记显示胞浆内自噬标记蛋白LC3B的表达增多,Western blot结果显示哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）水平显著降低,自噬基因相关蛋白5（Atg5）、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α亚基（p-AMPKα）、SIRT1水平显著增加（P<0.05）。与对照组相比,10μmol/L米诺环素组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶（p-p70s6... 

【文章来源】：天津医药. 2020,48(09)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料
    1.2 不同浓度米诺环素处理后U87和LN229细胞增殖和凋亡相关指标的检测
        1.2.1 细胞培养及分组
        1.2.2 MTT法检测细胞增殖能力
        1.2.3 免疫荧光染色检测LC3B的表达
        1.2.4 Western blot检测自噬和凋亡相关蛋白的表达
    1.3 shRNA干扰SIRT1表达后观察米诺环素对U87和LN229细胞自噬相关分子表达的影响
        1.3.1 SIRT1-shRNA载体构建
        1.3.2 慢病毒包装和转染
        1.3.3 qPCR检测shRNA干扰后SIRT1的表达
        1.3.4 Western blot检测SIRT1敲低后细胞自噬相关蛋白的表达
    1.4 统计学方法
2 结果
    2.1不同浓度米诺环素对胶质瘤细胞增殖能力的影响
    2.2不同浓度米诺环素对U87和LN229细胞自噬水平的影响
    2.3不同浓度米诺环素对U87和LN229细胞凋亡相关蛋白表达的影响
    2.4SIRT1敲低后米诺环素对U87和LN229细胞自噬水平的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Minocycline protects against myocardial ischemia/reperfusion injury in rats by upregulating MCPIP1 to inhibit NF-κB activation[J]. Quan Yi,Fang-hui Tan,Jia-an Tan,Xiu-hui Chen,Qing Xiao,Ying-hua Liu,Gui-ping Zhang,Jian-dong Luo.  Acta Pharmacologica Sinica. 2019(08)
[2]米诺环素对人类胶质瘤U87和LN229细胞体外增殖及凋亡的影响[J]. 赵海龙,严婉约,李巧巧,李科,刘丽,李丽娟.  遵义医学院学报. 2017(05)



本文编号：3155629