低氧条件下MicroRNA-576-3p通过低氧诱导因子-1α抑制神经胶质瘤细胞的迁移和促血管生成能力

发布时间：2021-04-25 00:27

　　目的:研究MicroRNA-576-3p与低氧条件下胶质瘤恶性进展的关系,通过体外观察Transwell小室下层的细胞数目、划痕实验中相对的迁移细胞数量以及血管形成实验中成管的状态,来分析miR-576-3p对低氧条件下胶质瘤迁移能力和促血管生成能力的影响。进一步通过双荧光素酶报告了解miR-576-3p与HIF-1α的靶向作用关系,以期分析相关作用机制,为神经胶质瘤的临床相关治疗提供新的见解。方法:使用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）在临床神经胶质瘤样品和低氧处理的神经胶质瘤细胞中检测miR?576-3p的表达,并分析其与胶质瘤级别和低氧条件下的表达差异。通过构建慢病毒稳定转染的胶质瘤细胞株,敲低miR-576-3p的表达并探究其对低氧处理的神经胶质瘤细胞迁移和促血管生成能力的影响。此外,使用miRWalk,miRanda和TargetScan网站在线工具预测miR?576?3p的候选靶标。通过双荧光素酶报告基因检测、蛋白质印迹（Western Blot）以及RT-PCR验证miR-576-3p与HIF-1α的作用关系。通过构建慢病毒稳定转染的细胞株,敲低HIF-1α的表达,... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词对照表
第1章 引言
第2章 实验材料与实验方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 肿瘤数据库、脑胶质瘤与非肿瘤样本的获取
        2.1.2 细胞株的获取
        2.1.3 细胞培养相关试剂材料
        2.1.4 免疫组化相关试剂材料
        2.1.5 RT-qPCR相关试剂材料
        2.1.6 细胞转染与稳定细胞系建立的相关试剂材料
        2.1.7 ELISA实验相关试剂材料
        2.1.8 Western Blot相关试剂材料
        2.1.9 细胞迁移能力检测相关试剂材料
        2.1.10 血管生成检测相关试剂材料
        2.1.11 双荧光素酶报告实验相关试剂材料
        2.1.12 实验所需的主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养、传代、冻存及复苏
        2.2.2 RT-qPCR检测样本中各指标的RNA表达水平
        2.2.3 临床组织免疫组化检测
        2.2.4 Western Blot检测各指标的蛋白表达水平
        2.2.5 细胞质粒与慢病毒转染以及稳定细胞系的构建
        2.2.6 双荧光素酶报告实验
        2.2.7 ELISA实验
        2.2.8 细胞划痕迁移实验
        2.2.9 Transwell迁移实验
        2.2.10 血管形成实验
        2.2.11 统计学分析
第3章 实验结果
    3.1 microRNA-576-3p在神经胶质瘤中的表达情况
    3.2 microRNA-576-3p对低氧条件下神经胶质瘤恶性进展的影响
    3.3 microRNA-576-3p靶向HIF-1α
    3.4 在低氧条件下敲低HIF-1α的表达能抑制胶质瘤恶性进展
    3.5 低氧下回复HIF-1α的表达缓解了miR-576-3p对胶质瘤的作用
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNA-506 is up-regulated in the development of pancreatic ductal adenocarcinoma and is associated with attenuated disease progression[J]. Run-Fen Cheng,Jian Wang,Jing-Yi Zhang,Lin Sun,Yan-Rui Zhao,Zhi-Qiang Qiu,Bao-Cun Sun,Yan Sun.  Chinese Journal of Cancer. 2016(12)



本文编号：3158347