5/35嵌合型腺病毒载体对脑胶质瘤的抑制作用

发布时间：2021-04-25 02:36

　　目的通过构建一种新型腺病毒载体,验证肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL基因）治疗胶质瘤的疗效,并证实新型载体的优势。方法经美国华盛顿大学实验室授权获得Ad/35△E1-△E3,即E1和E3缺失的5型腺病毒纤维fiber被35型新型载体。利用基因重组,构建出重组腺病毒质粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL。氯化铯密度梯度离心纯化Ad5/35△E1-△E3-TRAIL,并并测定病毒滴度。采用逆转录酶-多聚酶链反应（RT-PCR）、免疫荧光技术、蛋白质印迹法（Western blot）分别检测目的基因的表达。结果纯化后Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的病毒滴度为1.22×1015pfu/l。重组质粒经RT-PCR都扩增出104 bp的基因片段。通过免疫荧光和Western blot等方法检测到目的基因的高效表达。结论新型腺病毒载体质粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL能够高效的在脑胶质瘤细胞中表达。 

【文章来源】：中华神经外科疾病研究杂志. 2014,13(04)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
材料与方法
    一、材料
    二、嵌合腺病毒载体的构建
    三、重组腺病毒颗粒的包装及扩增
    四、重组腺病毒滴度测定
    五、体外病毒感染效率的检测
    六、RT-PCR检测基因的表达
    七、免疫荧光技术检测TRAIL基因在U251细胞的表达
    八、Western blot检测U251细胞转染后TRAIL蛋白表达
    九、统计学方法
结果
    一、重组腺病毒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的包装、扩增与纯化
    二、RT-PCR检测TRAIL基因体外表达
    三、免疫荧光检测TRAIL基因在U251细胞的表达
    四、Western blot分析TRAIL蛋白的表达
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]5/35嵌合型溶瘤腺病毒SG635对肝癌细胞的抑制作用[J]. 武玉强,张琪,陈伟,刘炜,台艳,陈规划.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2011(04)
[2]人35型及11型腺病毒的研究进展[J]. 陈东锋,石文芳,钱其军.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2006(06)



本文编号：3158537