MPP + 诱导SH-SY5Y细胞慢性损伤帕金森病模型的建立及鹿茸多肽的保护作用

发布时间：2021-04-30 08:06

　　背景和目的帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种中老年常见的神经系统退行性疾病，其发病率的上升不仅严重影响患者的生活质量，而且给家庭和社会带来沉重的负担。PD的临床症状包括静态下震颤、反应迟钝、僵硬和姿势扭曲等。PD的主要病理特点是黑质致密部的多巴胺能神经元丢失，进而使纹状体内的多巴胺水平降低。目前，PD的发病原因尚不完全清楚。各类体内和体外实4验显示，PD的发病机制涉及线粒体功能障碍、氧化应激、泛素化蛋白酶体等途径。最近的研究表明，PD发病机制还涉及未折叠蛋白聚积引起的内质网应激，即内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ER stress）介导的细胞凋亡参与PD的发病过程。因此，深入了解PD发病机制，探寻有效的神经保护剂是目前治疗PD的重要策略。PD发病机制的探讨和潜在治疗药物的筛选及评价，在很大程度上依赖于疾病相关体内外模型的建立及应用，特别是离体细胞模型的建立及应用。众所周知，PD是一种慢性疾病，具有缓慢、进展性的发病过程和特征，但是目前国内用于PD发病机制和药物筛选的离体细胞模型大多为急性损伤模型。我们的实践证明，采用常... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
目录
引言
第1章 绪论
    1.1 帕金森病的研究进展
        1.1.1 帕金森病的发病机制
        1.1.2 帕金森病的动物模型和细胞模型
        1.1.3 帕金森病的临床治疗
    1.2 多肽治疗帕金森病的研究现状
        1.2.1 动物和植物来源多肽
        1.2.2 生物内源性多肽
        1.2.3 人工合成多肽
第2章 VAPs 的提取、分离和纯化
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试剂
        2.1.2 仪器
        2.1.3 鹿茸
    2.2 试剂配制
        2.2.1 SDS-PAGE 相关试剂配制
        2.2.2 考马斯亮蓝蛋白含量测定相关试剂配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 鹿茸总多肽（VAPs）的提取
        2.3.2 SDS-PAGE
        2.3.3 VAPs 氨基酸组成分析
        2.3.4 VAPs 激光解吸电离飞行时间质谱分析
    2.4 实验结果
    2.5 讨论
第3章 VAPs 对 MPP~+急性损伤 SH-SY5Y 细胞的保护作用
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试剂
        3.1.2 仪器
        3.1.3 细胞
    3.2 试剂配制
        3.2.1 药物配制
        3.2.2 细胞培养相关试剂配制
        3.2.3 Western blot 试验相关试剂的配制
        3.2.4 免疫细胞化学相关溶液的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养
        3.3.2 MTT 法检测 MPP~+对 SH-SY5Y 细胞的损伤作用
        3.3.3 MTT 法检测 VAPs 对 MPP~+急性损伤 SH-SY5Y 细胞的保护作用
        3.3.4 Hoechst 33342 染色检测细胞凋亡
        3.3.5 罗丹明 123 染色检测△Ψm 改变
        3.3.6 细胞内 ROS 水平的检测
        3.3.7 Western blot 检测内质网应激相关蛋白
        3.3.8 免疫细胞化学检测内质网应激相关蛋白
    3.4 实验结果
        3.4.1 VAPs 对 MPP~+急性损伤 SH-SY5Y 细胞的保护作用
        3.4.2 VAPs 对 MPP~+急性损伤 SH-SY5Y 细胞凋亡的抑制作用
        3.4.3 VAPs 可部分恢复 MPP~+急性损伤SH-SY5Y 细胞的△Ψm
        3.4.4 VAPs 可降低 MPP~+急性损伤SH-SY5Y细胞内活性氧簇含量
        3.4.5 VAPs 对 MPP~+急性损伤 SH-SY5Y 细胞内质网应激相关蛋白表达的影响
    3.5 讨论
第4章 VAPs 对 MPP~+慢性损伤 SH-SY5Y 细胞的保护作用
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试剂
        4.1.2 仪器
        4.1.3 细胞
    4.2 试剂配制
        4.2.1 药物配制
        4.2.2 细胞培养相关试剂配制
        4.2.3 荧光染色相关试剂的配制
        4.2.4 Western blot 试验相关试剂的配制
        4.2.5 免疫细胞化学相关试剂的配制
    4.3 实验方法
        4.3.1 细胞培养
        4.3.2 MTT 法检测 MPP~+对 SH-SY5Y 细胞的损伤作用
        4.3.3 MTT 法检测 VAPs 对 MPP~+慢性损伤 SH-SY5Y 细胞的保护作用
        4.3.4 Hoechst 33342 染色检测细胞凋亡
        4.3.5 罗丹明 123 染色检测线粒体膜电位改变
        4.3.6 H2DCFDA 染色检测细胞内活性氧簇
        4.3.7 Western blot 检测内质网应激相关蛋白
        4.3.8 免疫细胞化学检测内质网应激相关蛋白
    4.4 实验结果
        4.4.1 VAPs 对 MPP~+慢性损伤 SH-SY5Y 细胞的保护作用
        4.4.2 VAPs 对 MPP~+慢性损伤 SH-SY5Y 细胞凋亡的影响
        4.4.3 VAPs 对 MPP~+慢性损伤 SH-SY5Y 细胞的线粒体膜电位的影响
        4.4.4 VAPs 对 MPP~+慢性损伤SH-SY5Y细胞内ROS含量的影响
        4.4.5 VAPs 下调 MPP~+慢性损伤 SH-SY5Y 细胞内质网应激相关蛋白的表达
    4.5 讨论
结论
参考文献
攻读学位期间所得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]蜂毒有助于治疗帕金森病[J]. 王忠田.  蜜蜂杂志. 2013(01)
[2]Mechanisms of MPP+-induced PC12 Cell Apoptosis via Reactive Oxygen Species[J]. 朱青,汪晶,张允建,孙圣刚.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2012(06)
[3]TRPC1和Ca2+在帕金森病内质网应激中的作用[J]. 邓娟,白洁.  生命科学. 2012(10)
[4]梅花鹿茸多肽的化学结构及生物活性[J]. 张郑瑶,段冷昕,周秋丽,新吉乐,蔺勇,张扬.  高等学校化学学报. 2012(09)
[5]伏隔核黑色素聚集激素在大鼠甲基苯丙胺行为敏化中的作用[J]. 孙丽丽,张艳,王君,朱维莉,赵励彦,薛言学,刘剑锋,陆林,时杰.  中国药理学与毒理学杂志. 2012(03)
[6]海南产芋螺毒素在疼痛与成瘾治疗中的应用前景[J]. 罗素兰,长孙东亭,吴勇,胡远艳,朱晓鹏,J.Michael McINTOSH.  中国药理学与毒理学杂志. 2012(03)
[7]经颅脑实质超声诊断帕金森病的临床应用[J]. 邱会卿,顾平,樊文峰.  临床误诊误治. 2011(10)
[8]鹿茸多肽及其生长因子制备工艺的研究进展[J]. 张郑瑶,尚禹东,牟凤辉,陆成伟,郑清川,周秋丽.  特产研究. 2011(03)
[9]PACAP对神经系统疾病保护作用的研究进展[J]. 毛姗姗,张咏梅.  生理科学进展. 2011(04)
[10]代森锰锌对PC-12细胞凋亡的影响[J]. 张劲松,栾春业,王强,徐艳,张晶,环飞,程洁,肖杭.  中国药理学与毒理学杂志. 2011(04)

博士论文
[1]增龄和预运动训练在小鼠帕金森发病中的作用：线粒体与自噬途径的分子生理学机制研究[D]. 姜宁.中国人民解放军军事医学科学院 2012
[2]罗格列酮通过抑制小胶质细胞活化而保护多巴胺能神经元的研究[D]. 何秀全.山东大学 2012
[3]环境毒性物质MPTP导致多巴胺能神经元损伤机理研究[D]. 王晟东.昆明理工大学 2011
[4]帕金森病相关蛋白Parkin对自噬调节的研究[D]. 陈冬.中国科学技术大学 2010
[5]6-羟基多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病模型差异蛋白质组学研究[D]. 王丹萍.吉林大学 2010
[6]长期低剂量皮下注射鱼藤酮制备多巴胺神经元损伤模型及其机制研究[D]. 张玉梅.大连医科大学 2009
[7]利用果蝇模型研究帕金森病相关基因α-synuclein，PINK1和LRRK2的作用机制[D]. 刘小平.中南大学 2007
[8]梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D]. 段冷昕.吉林大学 2007

硕士论文
[1]IL-22在大鼠嗜铬瘤细胞PC12中生物学作用的研究[D]. 潘文艳.扬州大学 2012
[2]帕金森病现代中医证治规律研究[D]. 孙家贺.山东中医药大学 2012
[3]DTT诱发内质网应激-自噬过程中活性氧的作用及其调节机制[D]. 项喜艳.吉林大学 2012
[4]东亚钳蝎毒素Martentoxin的分离纯化与功能研究[D]. 陈健.南京医科大学 2011
[5]P-糖蛋白抑制剂粉防己碱联合还原性谷胱甘肽对帕金森病大鼠脑内多巴胺能系统的影响研究[D]. 曹园园.苏州大学 2008
[6]EGCG对PQ诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制研究[D]. 厚荣荣.第四军医大学 2007



本文编号：3169146