帕金森病致病基因Parkin与突触相关蛋白synaptojanin1的相互作用研究

发布时间：2021-04-30 23:26

　　目的探讨帕金森病致病基因Parkin与突触相关蛋白synaptojanin1（SYJ-1）的关系。方法选择雄性8周龄野生型C57B/L小鼠5只,获取脑组织裂解物,分为阳性对照组、抗Parkin抗体组、抗SYJ-1抗体组和阴性对照组,阳性对照组不加任何抗体,后3组分别加入抗Parkin抗体、抗SYJ-1抗体、无效抗体处理,检测Parkin和SYJ-145表达。选择人胚肾细胞系（HEK-293T）细胞进行结构域鉴定实验,用免疫沉淀反应检测Parkin与SYJ-1共沉淀。检测构建Parkin不同结构域截短突变质粒。Pakrin对SYJ-1泛素化降解实验中,将HEK-293T细胞分为6组（n=5）转染:绿色荧光蛋白（GFP）-SYJ-145+HA-UB质粒组（A组）、GFP-SYJ-145+Flag-Parkin组（B组）、GFP-SYJ-145+HA-UB+Flag-Parkin质粒组（C组）、MG132处理的GFP-SYJ-145+HA-UB+MG132质粒组（D组）、GFP-SYJ-145+Flag-Parkin+MG132质粒组（E组）和GFP-SYJ-145+HA-UB+Flag-P... 

【文章来源】：中华老年心脑血管病杂志. 2020,22(09)北大核心

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物与分组
        1.1.2 细胞系和主要试剂
    1.2 小鼠脑组织蛋白免疫共沉淀
    1.3 Parkin不同片段缺失突变质粒的构建
    1.4 细胞培养和转染
    1.5 Western blot检测
    1.6 统计学方法
2 结 果
    2.1 小鼠脑组织内Parkin与SYJ-1相互作用
    2.2 Parkin不同结构域截短突变质粒
    2.3 Parkin与SYJ-1相互作用结构域的鉴定
    2.4 Parkin促进SYJ-1的泛素化降解
3 讨 论



本文编号：3169685