人TDP-43-M337V对NSC-34细胞内ROCK/PTEN信号通路的影响

发布时间：2021-05-10 03:29

　　目的探讨NSC-34细胞转染TDP-43-M337V后对细胞内ROCK/PTEN信号通路的影响。方法1、细胞培养:将空转型、野生型和突变型三株NSC-34细胞系从液氮中分别取出,接种于2520cm2玻璃培养瓶中,置于37℃、5%CO2条件的培养箱内进行复苏、培养和传代。2、利用免疫组化方法来观察转染细胞的形态变化;3、细胞氧化损伤的程度通过检测细胞内丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量来反应;4、通过MTT检测转染基因对NSC-34细胞活性的影响;5、通过应用Western20blots法来检测各组细胞中ROCK/PTEN信号通路下游相关分子在蛋白水平上的表达差异;6、通过ROCK活性检测试剂盒来检测ROCK活性,以观察在该信号通路中ROCK活性的变化。结果1、转染p20DEST30-EGFP-TDP-43-M337V质粒的细胞与转染p20DEST30-EGFPTDP-43-wt和p20DEST30-EGFP质粒组细胞相比,胞体变圆,突起减少,且轴突变短;经过细胞内MDA含量检测发现,突变的细胞内MDA含量明显高于其它两组细胞（P<0.05）;同时,经过MTT检... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
符号说明
引言
第一章 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验细胞
        1.1.2 主要试剂/试剂盒
        1.1.3 主要仪器、设备及耗材
        1.1.4 培养基及主要缓冲液的配制
        1.1.5 Western blotting所需溶液的配制
        1.1.6 免疫组化试剂的配制
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞复苏、培养、传代和冻存
        1.2.2 细胞免疫组化
        1.2.3 MDA测定
        1.2.4 MTT测定
        1.2.5 Western blotting
        1.2.6 ROCK活性检测
    1.3 统计分析
第二章 结果
    2.1 细胞形态的变化
    2.2 细胞内脂质过氧化水平的检测
    2.3 MTT检测转染基因对NSC-34细胞活性的影响
    2.4 转染pDEST30-EGFP-TDP43M337V质 粒对NSC-34细 胞内ROCK及ROCK/PTEN通路下游效应因子蛋白表达水平的影响
    2.5 ROCK活性测定检测转染pDEST30-EGFP-TDP43M337V质粒的NSC-34细胞对ROCK活性的影响
第三章 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢



本文编号：3178586