肌醇失衡PI3K/Akt信号通路在神经管发育中的作用机制研究

发布时间：2021-05-10 23:46

　　神经管畸形（Neural tube defects,NTDs）是中枢神经系统最为常见的先天畸形,全世界范围内的发病率为0.05%-0.2%,严重影响患儿的生理发育和生活质量,其发生机制尚未阐明。研究发现,肌醇（Inositol）是维生素B族物质,参与了人体许多重要物质的合成和代谢,在胚胎发育,尤其是神经管发育过程中至关重要,与NTDs的发生密切相关。在前期已建立的人类NTDs样本库及血浆肌醇检测方法-气相色谱质谱联用技术（GC-MS）基础上,随机选出NTDs胎儿及正常胎儿样本作为实验组及对照组。利用蛋白质芯片技术及生物信息学方法对两组神经组织蛋白质磷酸化的水平进行检测,筛选出72个磷酸化水平差异显著的蛋白,经KEGG分析,覆盖了56个pathway,其中PI3K/Akt信号通路相关蛋白磷酸化水平变化显著。为进一步研究肌醇代谢紊乱是否经PI3K/Akt信号通路影响NTDs发生,本课题在已建立的肌醇代谢紊乱NTDs小鼠动物模型基础上,收集NTDs和正常小鼠胚胎及母体血样、组织样本,采用体视显微镜及苏木精-伊红染色法（HE染色）方法判定小鼠胚胎表型的正常与否,利用实时荧光定量（Real-ti... 

【文章来源】：北京工业大学北京市 211工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
第1章 绪论
    1.1 神经管畸形概述
        1.1.1 神经管畸形的危害
        1.1.2 神经管的形成及影响因素
        1.1.3 细胞的增殖、凋亡与NTDs
    1.2 肌醇缺乏与NTDs
        1.2.1 肌醇缺乏与神经管发育
        1.2.2 肌醇与PI3K/Akt信号通路
        1.2.3 肌醇与GSK3β
    1.3 本课题的研究内容
        1.3.1 研究目标
        1.3.2 研究内容
第2章 人群神经组织样本蛋白质磷酸化水平检测
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 人类NTDs临床样本的筛选
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 样品蛋白质抽提和标记
        2.3.2 芯片杂交与清洗
        2.3.3 芯片扫描
        2.3.4 质控分析
        2.3.5 数据分析
    2.4 芯片实验结果与讨论
        2.4.1 蛋白质标准曲线的制作
        2.4.2 蛋白质芯片质量控制结果
        2.4.3 蛋白质芯片生物信息学分析
    2.5 本章小结
第3章 肌醇代谢失衡NTDs小鼠模型验证
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验动物来源及饲养
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 实验试剂
        3.2.4 溶液配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 肌醇缺乏动物模型及组织样本收集
        3.3.2 组织病理检测
        3.3.3 RT-PCR检测
        3.3.4 Western blotting检测
        3.3.5 统计分析
    3.4 实验结果与讨论
        3.4.1 肌醇代谢障碍对胚胎神经管发育的影响
        3.4.2 肌醇代谢障碍对PI3K/Akt通路的影响
        3.4.3 PI3K/Akt通路相关基因RT-PCR检测结果
    3.5 本章小结
第4章 肌醇代谢失衡细胞模型验证
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验仪器
        4.2.3 实验试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 细胞处理
        4.3.2 测定细胞周期
        4.3.3 测定细胞凋亡
        4.3.4 统计学分析
    4.4 实验结果与讨论
        4.4.1 低肌醇状态对细胞周期的影响
        4.4.2 低肌醇状态对细胞凋亡的影响
    4.5 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间所发表的学术论文
致谢



本文编号：3180285