AAV2-eGFP体外转染修饰的间充质干细胞移植到野生型腺相关病毒致敏大鼠脑内后目的基因表达情况的研究

发布时间：2021-05-12 11:36

　　背景：促进血管生成是治疗脑血管病的主要治疗策略,促血管生成相关的基因（VEGF或Ang-1）治疗是主要的研究方向,腺相关病毒2型（AAV2）以其固有的特点成为最为广泛采用的病毒载体,随着研究的深入和临床实验的开展,人们发现虽然AAV没有致病性,但人群中普遍存在针对野生型AAV2的中和抗体,从而严重影响了以AAV2为载体的转基因效率。此外AAV是一种单链DNA病毒,其目的基因的表达往往需要2-3周的时间,这对于对治疗时间窗有重要要求的脑缺血性疾病也是极为不利的。间充质干细胞因具有极低的免疫原性,同种异基因移植一般不诱导免疫排斥反应；且间充质干细胞具有很强的向病变区域趋化迁移功能,作为一种细胞载体已被广泛用作基因的研究。目的：本研究拟观察间充质干细胞作为一种载体细胞脑内移植后可否逃避野生型AAV致敏大鼠的免疫反应,从而实现目的基因的及时表达。方法：构建AAV2-eGFP体外修饰大鼠骨髓来源间充质干细胞使其稳定表达eGFP,采用立体定向注射方法移植到野生型AAV致敏大鼠脑内,通过免疫荧光染色、Weston Blot等方法检测细胞存活及eGFP表达情况。结果：AAV2-eGFP体外可有效转染间... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

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致谢
中文摘要
Abstract
缩略词表
目录
1 引言
2 材料与方法
    2.1 本实验简明技术路线图如下
    2.2 实验动物
    2.3 主要试剂及仪器
    2.4 大鼠骨髓间充质干细胞分离培养
    2.5 AAV2-eGFP构建
    2.6 AAV2-eGFP体外转染间充质干细胞
    2.7 间充质干细胞立体定向脑内移植及AAV2-eGFP脑内注射
    2.8 组织病理及免疫组化
    2.9 RT-PCR及Western Blot
    2.10 抗体滴度检测
    2.11 统计学处理
3 结果
    3.1 rAAV2-eGFP体外转染MSCs
    3.2 MSCs-eGFP脑内移植
    3.3 RT-PCR和Western Blot检测结果
    3.4 MSCs-eGFP脑内移植或者rAAV2-eGFP注射后中和抗体滴度变化
4 讨论
5 结论
参考文献
综述
    参考文献
作者简历



本文编号：3183341