FoxM1驱动ADAM17/EGFR作用环路促进胶质瘤间质转化

发布时间：2021-05-14 19:40

　　目的:本研究旨在探索FoxM1/ADAM17对人脑胶质瘤细胞间质转化的作用,探明Fox M1/ADAM17/EGFR作用环路的活化机制,为脑胶质瘤的临床诊断、治疗提供新的策略。方法:（1）应用荧光定量PCR、Western blotting和免疫荧光分别检测4种人脑胶质瘤细胞株中Fox M1、ADAM17、间质表型标志物（FN、N-ca、vimentin、YKL-40）、上皮表型标志物E-ca的mRNA、蛋白表达水平;（2）应用CCK8（Cell Counting Kit-8）法、平板细胞克隆形成实验分别评价细胞增殖能力、克隆形成能力;（3）应用划痕实验和Transwell迁移实验、成骨诱导和成脂诱导实验分别检测细胞的迁移能力、成骨、成脂分化潜能,评价人脑胶质瘤细胞间质转化能力;（4）应用双荧光素酶报告基因、点突变技术、染色质免疫共沉淀法（ChIP）探明FoxM1对ADAM17表达的转录调控机制;（5）用Western blotting、基因转染等手段分析FoxM1/ADAM17/EGFR作用环路中上下游分子的变化,探明Fox M1调控胶质瘤间质转化的作用机制。结果:（1）SW1783... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词中英文注释表
第一章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 脑胶质瘤的分子分型及治疗策略
        1.1.2 FoxM1在脑胶质瘤发生发展中的作用
        1.1.3 ADAM17在胶质瘤发生发展中的作用
        1.1.4 EGFR/PI3K/AKT在胶质瘤发生发展中的作用
    1.2 本研究的目的意义、内容、技术路线
        1.2.1 目的意义
        1.2.2 研究内容
        1.2.3 技术路线图
第二章 FoxM1通过ADAM17促进胶质瘤细胞生长
    2.1 材料和试剂
        2.1.1 主要材料
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 方法
        2.2.1 细胞复苏、培养及传代：
        2.2.2 定量PCR
        2.2.3 Western blotting
        2.2.4 免疫荧光
        2.2.5 细胞转染
        2.2.6 筛选稳转细胞
        2.2.7 CCK8
        2.2.8 克隆形成实验
        2.2.9 构建含有FoxM1结合位点的ADAM17启动子区域报告基因及其突变体
        2.2.10 染色质免疫共沉淀
        2.2.11 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 FoxM1、ADAM17在人脑胶质瘤细胞中的表达
        2.3.2 FoxM1促进胶质瘤细胞生长
        2.3.3 ADAM17促进胶质瘤细胞生长
        2.3.4 FoxM1通过结合ADAM17启动子促进了其表达
    2.4 讨论
第三章 FoxM1/ADAM17途径促进人脑胶质瘤细胞间质转化
    3.1 材料和试剂
        3.1.1 主要材料
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 方法
        3.2.1 细胞复苏、培养及传代
        3.2.2 定量PCR
        3.2.3 Western blotting
        3.2.4 Transwell
        3.2.5 成骨诱导
        3.2.6 成脂诱导
        3.2.7 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 人脑胶质瘤细胞中间质表型标志物与FoxM1、ADAM17的相关性
        3.3.2 不同胶质瘤细胞株迁移能力、成骨、成脂诱导分化潜能比较
        3.3.3 FoxM1促进胶质瘤细胞间质转化
        3.3.4 FoxM1调控了胶质瘤细胞间质表型标志物的表达
        3.3.5 ADAM17促进胶质瘤细胞间质转化
        3.3.6 ADAM17调控了胶质瘤细胞间质表型标志物的表达
        3.3.7 FoxM1通过ADAM17促进胶质瘤细胞间质转化
    3.4 讨论
第四章 FoxM1/ADAM17/EGFR作用环路的活化机制
    4.1 材料和试剂
        4.1.1 主要材料
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器
    4.2 方法
        4.2.1 细胞复苏、培养及传代
        4.2.2 Western blotting
        4.2.3 统计学分析
    4.3 结果
        4.3.1 FoxM1调控了ADAM17/EGFR/AKT信号通路
        4.3.2 FoxM1通过ADAM17调控了EGFR/AKT信号通路
        4.3.3 ADAM17/EGFR/GSK3β 通路维持了FoxM1高表达
    4.4 讨论
结论与展望
参考文献
致谢
在校期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]FoxM1 overexpression promotes epithelial-mesenchymal transition and metastasis of hepatocellular carcinoma[J]. Fan-Di Meng,Ji-Chao Wei,Kai Qu,Zhi-Xin Wang,Qi-Fei Wu,Ming-Hui Tai,Hao-Chen Liu,Rui-Yao Zhang,Chang Liu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[2]ADAM17在脑胶质瘤中表达的研究[J]. 张艳,张雪鹏,吕捷,杨艳君.  肿瘤学杂志. 2013(04)
[3]EGFR信号通路调控人胶质瘤U87细胞侵袭转移的分子机制[J]. 邢细红,曾晖,王雄伟,郭东生,汪雷,万志先,李焘,周红建.  重庆医学. 2012(18)
[4]EGF和AG1478对GL15细胞增殖、侵袭和GFAP表达的影响[J]. 席桂发,王宝峰,王和平,叶飞,郭东生,雷霆.  中华神经外科疾病研究杂志. 2007(04)
[5]胶质瘤中EGFR扩增、过表达及其与肿瘤增殖关系的研究[J]. 董伦,浦佩玉,王虎,康春生,王广秀.  中华神经医学杂志. 2005(12)

博士论文
[1]转录因子FOXM1在肿瘤细胞上皮间质转化过程中的功能研究[D]. 杨潮.湖南大学 2013

硕士论文
[1]ADAM17在U87胶质瘤干细胞迁移和侵袭中的作用及机制[D]. 陈祥荣.南方医科大学 2013
[2]PI3K抑制剂LY294002逆转卵巢癌细胞紫杉醇化疗耐药以及对纺锤体检测点蛋白Mad2表达的影响[D]. 周志刚.华中科技大学 2010



本文编号：3186217