氧糖剥夺细胞模型来源细胞外囊泡的蛋白质组学研究

发布时间：2021-05-15 17:15

　　背景:脑卒中以高致死率和致残率为主要特点,是威胁人类的生命健康的主要因素之一。在脑卒中患者中绝大部分为缺血性脑卒中（Ischemic stroke,IS）,其占比达到了87%。IS是指由于血栓的形成或者是栓塞致使局部脑组织血液供应不足,进而导致神经细胞缺血缺氧。由于大脑属于高能耗器官,对于周围环境变化比较敏感,随着缺血缺氧时间的延长会对神经细胞产生不可逆性损伤。目前,最有效的治疗方法为溶栓疗法,但溶栓疗法治疗不仅时间窗窄且伴随着出血的风险,所以,能够通过溶栓疗法进行治疗的受益人群有限。因此,探索IS发生发展机制,寻找更有效的治疗靶点具有重要的临床意义。细胞外囊泡（Extracellular vesicles,EVs）是由细胞分泌的磷脂双分子层包裹纳米级囊泡样结构。除了在细胞相邻细胞间传递信息外,最主要的功能特点是能够穿过血脑屏障,进而完成血液与中枢神经组织之间的信息交流。EVs携带有供体细胞的蛋白质、脂质和核酸,当被受体细胞摄取后,EVs中所有物质释放到受体细胞中,进而将供体细胞的信息传递给受体细胞,并对受体细胞产生一定的调控作用。介于以上的功能特点,近年来关于EVs在中枢神经系统疾病... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
前言
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 缺血性卒中伤研究进展
    1.2 细胞外囊泡研究进展
第2章 OGD损伤的PC12细胞通过其分泌的EVs诱导正常PC12细胞凋亡
    2.1 试剂与材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 PC12的处理
        2.2.2 PC12的冻存保种
        2.2.3 氧糖剥离模型的构建
        2.2.4 CCK-8 测细胞的存活率
        2.2.5 流式细胞术分析凋亡
        2.2.6 细胞外囊泡的分离
        2.2.7 细胞外囊泡形态学鉴定
        2.2.8 细胞外囊泡特异性标记的鉴定
        2.2.9 OGD处理PC12细胞来源EVs诱导正常PC12细胞凋亡
    2.3 实验结果
        2.3.1 PC12细胞OGD模型的建立
        2.3.2 EVs的分离鉴定
    2.4 讨论
        2.4.1 PC12细胞OGD模型的建立
        2.4.2 OGD处理PC12细胞来源EVs的分离鉴定及功能分析
第3章 细胞外囊泡的蛋白质组学分析
    3.1 试剂与材料
    3.2 实验方法
        3.2.1 氧糖剥离模型的构建
        3.2.2 细胞外囊泡的分离
        3.2.3 蛋白质提取
        3.2.4 胰蛋白酶解
        3.2.5 TMT标记
        3.2.6 HPLC分级
        3.2.7 液相色谱-质谱联用分析
        3.2.8 数据库搜索
        3.2.9 Gene Ontology分析
        3.2.10 亚细胞定位
        3.2.11 蛋白质结构域注释
        3.2.12 蛋白质功能富集
        3.2.13 基于蛋白功能富集的聚类分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 质谱质量检测
        3.3.2 EVs蛋白质组学分析总览
        3.3.3 EVs蛋白质组学重复性检验
        3.3.4 Venn diagram分析差异表达蛋白的重叠情况
        3.3.5 差异表达蛋白的Gene Ontology二级注释分类
        3.3.6 差异表达蛋白的亚细胞定位分析
        3.3.7 差异表达蛋白GO功能富集
        3.3.8 蛋白质结构域富集
        3.3.9 聚类分析
    3.4 讨论
第4章 蛋白质相互作用及PRM定量分析
    4.1 试剂与材料
    4.2 实验方法
        4.2.1 氧糖剥离模型的构建
        4.2.2 EVs的分离
        4.2.3 蛋白提取
        4.2.4 胰酶酶解
        4.2.5 液相色谱-质谱联用分析
        4.2.6 数据处理
        4.2.7 蛋白质相互作用分析
    4.3 实验结果
    4.4 讨论
第5章 结论
第6章 创新点
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Cerebral ischemia and neuroregeneration[J]. Reggie H.C.Lee,Michelle H.H.Lee,Celeste Y.C.Wu,Alexandre Couto e Silva,Harlee E.Possoit,Tsung-Han Hsieh,Alireza Minagar,Hung Wen Lin.  Neural Regeneration Research. 2018(03)
[2]Molecular chaperones and hypoxic-ischemic encephalopathy[J]. Cong Hua,Wei-na Ju,Hang Jin,Xin Sun,Gang Zhao.  Neural Regeneration Research. 2017(01)



本文编号：3188032