LUC7L3通过YAP1信号影响恶性脑膜瘤细胞增殖和侵袭的研究

发布时间：2021-05-17 01:45

　　目的:研究LUC7L3是否影响恶性脑膜瘤细胞的增殖和侵袭,探讨LUC7L3是否通过YAP1信号通路发挥作用。方法:1.通过慢病毒感染恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株,分别沉默和过表达LUC7L3。实验分五组:空白组（Blank）,沉默阴性对照组（NC-sh）,沉默LUC7L3组（LUC7L3-sh）,过表达阴性对照组（NC-ox）,过表达LUC7L3组（LUC7L3-ox）。使用q-PCR、Western blot方法检测各组细胞LUC7L3 mRNA和蛋白表达水平。2.通过CCK8、平板克隆实验、EdU增殖实验检测各组细胞增殖情况,流式细胞学检测细胞周期变化。3.通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验观察各组细胞迁移和侵袭情况。4.Western blot法检测各组细胞中LUC7L3、YAP1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-kB、p-NF-kB、Vimentin、Elk1、p-Elk1、Caspase-3、p-S6、mTOR、p-mTOR、HER-2、PARP、PI3K、Merlin蛋白表达水平。5.使用p-ERK1/2特异性抑制剂U0126后,检测各组细胞LUC7L3... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 LUC7L3 对恶性脑膜瘤细胞增殖与侵袭的影响。
    2.1 材料与方法
        2.1.1 恶性脑膜瘤细胞株的培养
        2.1.2 构建沉默和过表达LUC7L3 基因慢病毒
        2.1.3 慢病毒包装、浓缩、纯化与滴度测定
        2.1.4 慢病毒感染
        2.1.5 q-PCR检测恶性脑膜瘤细胞株LUC7L3 基因mRNA的表达情况
        2.1.6 Western blot检测各组脑膜瘤细胞LUC7L3 蛋白表达情况
        2.1.7 CCK8 增殖实验
        2.1.8 平板克隆增殖实验
        2.1.9 EdU增殖实验
        2.1.10 流式细胞术检测细胞周期
        2.1.11 划痕实验检测沉默和过表达LUC7L3 基因对恶性脑膜瘤细胞迁移的影响
        2.1.12 Transwell小室实验检测沉默和过表达LUC7L3 基因对恶性脑膜瘤细胞侵袭的影响
        2.1.13 数据处理、统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 沉默与过表达LUC7L3 基因测序结果
        2.2.2 q-PCR检查各组细胞LUC7L3 基因mRNA的表达情况
        2.2.3 Western blot检查恶性脑膜瘤细胞LUC7L3 基因蛋白的表达情况
        2.2.4 沉默LUC7L3对IOMM-Lee细胞形态学的影响
        2.2.5 CCK8 实验检测各组细胞生长曲线
        2.2.6 平板克隆测定LUC7L3 对恶性脑膜瘤细胞增殖活力的影响
        2.2.7 EdU细胞增殖实验
        2.2.8 流式细胞术检测各组细胞周期变化情况
        2.2.9 划痕实验检测LUC7L3 对各组细胞迁移的影响
        2.2.10 Trasswell检测LUC7L3在IOMM-Lee细胞侵袭中的作用
第3章 LUC7L3 影响脑膜瘤IOMM-Lee细胞增殖和侵袭分子机制的探索
    3.1 材料与方法
        3.1.1 Westernblot检测各组细胞中PI3K信号通路、MAPK信号通路、Hippo信号通路中关键蛋白的表达水平
        3.1.2 Western blot检测使用p-ERK抑制剂(U0126)后各组细胞LUC7L3、YAP1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-kB、p-NF-kB蛋白的表达水平
        3.1.3 数据处理、统计学分析
    3.2 结果
        3.2.1 各组细胞中PI3K信号通路、MAPK信号通路、Hippo信号通路中关键蛋白的表达量
        3.2.2 使用p-ERK抑制剂(U0126)后各组细胞LUC7L3、YAP1、ERK1/2、p-ERK1/2、NF-kB、p-NF-kB蛋白表达量
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
附录
攻读学位期间的研究成果
综述
    1
        1.1 MAPK/Elk1 信号轴
        1.2 Elk1 与下游基因
        1.3 Elk1与miRNA、lncRNA
    2
        2.1 Elk1 与肝癌
        2.2 Elk1 与卵巢癌
        2.3 Elk1 与膀胱癌
        2.4 Elk1 与前列腺癌
        2.5 Elk1 与乳腺癌
        2.6 Elk1 与其他肿瘤
    3 总结与展望
    参考文献



本文编号：3190825