缝隙连接蛋白43 Ser368位点磷酸化水平变化在ET-1诱导的脑血管痉挛中作用的研究

发布时间：2021-05-18 07:09

　　目的：目前研究表明，Cx43Ser368位点磷酸化状态对Cx43缝隙连接通道功能有着重要的影响，此位点磷酸化可通过调节Cx43蛋白的代谢过程以及Cx43通道的通透性和电导率等，调节缝隙连接通道功能。通过枕大池穿刺二次注血方法构建的蛛网膜下腔出血模型中，运用特异性抗Cx43Ser368磷酸化抗体检测痉挛脑血管中蛋白表达情况时发现：Cx43Ser368位点磷酸化水平与脑血管痉挛程度成正相关。为此，本次实验旨在改变脑血管壁细胞中Cx43Ser368位点的磷酸化水平，观察Cx43Ser368位点磷酸化水平的改变对脑血管痉挛程度的影响。通过上述研究进一步明确蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的病理机制，为预防和治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛疾病寻找新的有效方法。方法：1、构建Cx43Ser368A慢病毒载体：以pCMV-Cx43cDNA质粒为模板克隆出目的基因Cx43cDNA，并应用PCR技术定点突变Cx43Ser368位点。运用Gateway技术构建真核表达载体PLV.Ex3d.p/neo-EF1A<Cx43>IRES/EGFP质粒。筛选阳性质粒并测序鉴定，将含有突变Cx43Ser368A... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 前言
第2章 实验材料与仪器
    2.1 实验动物
    2.2 实验试剂
        2.2.1 主要购置试剂
        2.2.2 主要配置试剂
    2.3 实验设备
第3章 实验方法
    3.1 Cx43 Ser368A 慢病毒载体构建
        3.1.1 Cx43 cDNA 的扩增
        3.1.2 PCR 产物分离与回收
        3.1.3 点突变 Cx43，PCR 扩增 attB1- Cx43-attB2
        3.1.4 构建 pDown-Cx43
IRES/EGFP">        3.1.5 构建 PLV.Ex3d.p/neo-EF1AIRES/EGFP

        3.1.6 病毒包装
        3.1.7 滴度测定
    3.2 动物模型的构建
        3.2.1 模型构建方法
        3.2.2 模型鉴定
    3.3 游离血管环张力实验和游离血管条孵育实验
        3.3.1 实验分组
        3.3.2 血管环和血管条的制作
        3.3.3 游离血管环张力实验
        3.3.4 游离血管条孵育实验
    3.4 数据统计分析
第4章 实验结果
IRES/EGFP 质粒构建结果">    4.1 PLV.Ex3d.p/neo-EF1AIRES/EGFP 质粒构建结果

    4.2 慢病毒包装和滴度测定结果
    4.3 慢病毒感染模型的鉴定
    4.4 血管环张力实验结果
    4.5 体外脑血管条孵育实验结果
第5章 讨论
    5.1 SAH 与 DIND
    5.2 CVS 与 DIND
    5.3 CVS 发生机制
    5.4 CVS 的临床治疗研究
    5.5 缝隙连接简介
    5.6 缝隙连接与血管生理功能调节
    5.7 脑血管痉挛与缝隙连接
    5.8 Cx43 和磷酸化
    5.9 Cx43 Ser368 位点作用
    5.10 存在的问题和展望
第6章 结论
致谢
参考文献
附图
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋白激酶C激动剂致心律失常作用机制的研究[J]. 倪明科,张存泰,李连东,阮磊,王琳.  临床心血管病杂志. 2010(08)
[2]缝隙连接蛋白43磷酸化在兔脑血管痉挛中的表达变化[J]. 陈红伟,洪涛,宋湖平,叶新运,汪阳.  重庆医学. 2010(09)
[3]蛛网膜下腔出血量与脑血管痉挛兔基底动脉Cx43蛋白表达相关性研究[J]. 罗军,娄建云,洪涛.  赣南医学院学报. 2010(02)
[4]RNA干扰抑制血管平滑肌细胞缝隙连接Cx43介导的细胞间通讯[J]. 洪涛,冯九庚,蒋丽萍,段剑,汪阳,江志群.  中华实验外科杂志. 2006(06)
[5]终池持续引流对急性重型颅脑损伤患者血浆中ET CGRP含量及脑血管痉挛指数的影响[J]. 张卫华,黄勤,梁兆煜,汪宝贞,彭文辉,潘汉杰,陈保忠.  中国急救医学. 2003(07)



本文编号：3193368

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