MK-2206和rapamycin联合应用治疗神经母细胞瘤产生协同作用的机制研究

发布时间：2021-05-27 14:01

　　目的:神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）是儿童最常见的颅外实体恶性肿瘤,起源于神经嵴,常原发于肾上腺,其死亡率约占儿童肿瘤死亡率的15%。根据已明确的预后因素,包括确诊年龄、国际神经母细胞瘤分期系统（INSS）、组织病理学、DNA指数和MYCN基因扩增情况,将患者分为低危、中危和高危组。高危组患者预后较差且易复发,其中肿瘤耐药是治疗过程中存在的最大障碍。因此,寻求新的药物以提高NB患者治疗效果并改善预后的愿望尤为迫切。Akt是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,在多种肿瘤中发挥重要作用。在NB肿瘤组织中可以检测到Akt活性增强,Akt活性增强的NB患者往往预后较差,表明NB患者的预后与Akt的活化有着密切联系。MK-2206是Akt的特异性抑制剂,我们前期研究发现MK-2206作为单一药物不仅具有抑制NB细胞体内体外生长的作用,而且能够提高NB细胞对化疗药物的敏感性。有研究人员发现,MK-2206与mTOR抑制剂RAD001联合治疗肝癌和胆管癌细胞具有协同作用。我们前期研究发现,MK-2206和mTOR抑制剂rapamycin联合应用时在某些NB细胞中产生明显的协同作用,这些NB细胞... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 MK-2206和rapamycin联合应用通过自噬和程序性坏死诱导神经母细胞瘤细胞死亡
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 CCK-8细胞增殖检测
            2.2.3 IncuCyte Zoom变焦活细胞成像
            2.2.4 YOYO-1染色
            2.2.5 透射电子显微镜观察细胞超微结构
            2.2.6 Western Blot
            2.2.7 NB荷瘤裸鼠模型建立、处理及取材
            2.2.8 HE染色
            2.2.9 免疫组织化学染色
            2.2.10 统计分析
    3 结果
        3.1 MK-2206和rapamycin联合应用治疗NB细胞具有协同作用并且不依赖于caspase
        3.2 基因芯片检测
        3.3 细胞自噬介导MK-2206和rapamycin联合诱导的NB细胞
        3.4 细胞程序性坏死介导MK-2206和rapamycin联合诱导的NB细胞
        3.5 MK-2206和rapamycin联合诱导裸鼠NB肿瘤组织中的细胞死亡及自噬和程序性坏死相关分子变化
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第二部分 MK-2206和rapamycin联合应用治疗神经母细胞瘤的机制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 CCK-8细胞增殖检测
            2.2.3 IncuCyte Zoom变焦活细胞成像
            2.2.4 细胞转染siRNA(以6cm培养皿为例）
            2.2.5 质粒提取
            2.2.6 细胞转染质粒(以6cm培养皿为例）
            2.2.7 Western Blot
            2.2.8 Seahorse能量代谢分析
            2.2.9 统计分析
    3 结果
        3.1 沉默MYCN基因可逆转MK-2206和rapamycin联合应用诱导的细胞死亡
            3.1.1 在NGP、BE2细胞中转染siRNA沉默MYCN基因
            3.1.2 沉默MYCN基因可逆转MK-2206和rapamycin联合应用诱导的NB细胞死亡
        3.2 过表达MYCN可增加NB细胞对MK-2206和rapamycin联合应用的敏感性
            3.2.1 在AS、SY5Y细胞中转染质粒使MYCN基因过表达
            3.2.2 过表达MYCN可增加NB细胞对MK-2206和rapamycin联合应用的敏感性
        3.3 MK-2206和rapamycin联合处理NGP细胞后糖酵解功能受损
        3.4 MYCN表达水平对NB细胞糖酵解及线粒体氧化磷酸化水平的影响
            3.4.1 MYCN表达水平对NB细胞糖酵解水平的影响
            3.4.2 MYCN表达水平对NB细胞线粒体氧化磷酸化水平的影响
            3.4.3 MYCN表达水平对NB细胞代谢潜力的影响
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
本研究的创新性评价
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeting uptake transporters for cancer imaging and treatment[J]. Yuchen Zhang,Joanne Wang.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2020(01)



本文编号：3207704